电泳法测定依诺肝素钠组分含量---非专业翻译求修改 - 药群论坛

下述是一个肝素钠的电泳法检测含量的方法，因译者没有接触过这种试验，希望各位对译文中不专业或错误的地方提出意见和建议，万分感谢！！！

取琼脂4g，加水200ml，置沸水水浴中加热使溶胀完全后，于45-50℃冷却后，倒入浅口容器中，厚度约10mm，精致，待凝结成薄层后，将玻璃板平放至薄层上。

制胶取琼脂糖289mg，加醋酸钡缓冲液（取0.04M醋酸钡适量，用冰醋酸调pH至5.8） 48ml，混匀，置水浴中加热使溶胀完全后，于45-50℃冷却，将胶液涂布于玻璃板（4.5 cm×7.5cm×1.5mm）上，厚度约1.5mm，静置，待凝胶结成无气泡的均匀薄层，即得。

电泳槽A 取琼脂糖NA 1.5g，加入醋酸钡缓冲液250ml，混匀，置水浴中加热使溶胀完全后，于45-50℃冷却，将胶液倒入电泳槽，厚度约15mm，于4℃静置过夜，待凝胶结成均匀薄层后，移走电泳槽中的电极及其中部槽架。

电泳槽B 取琼脂糖NA 1.5g，加入1,2-二氨基丙烷缓冲液（取0.05M 1,2-二氨基丙烷适量，用冰醋酸调pH至9.0）250ml，混匀，置水浴中加热使溶胀完全后，于45-50℃冷却，将胶液倒入电泳槽，厚度约15mm，于4℃静置过夜，待凝胶结成均匀薄层后，移走电泳槽中的电极及其中部槽架。

溶液配制：分别取依诺肝素钠供试品和对照品适量，分别制成浓度为10mg/ml的溶液，并往溶液中加入甲酚红，作为供试品溶液和对照品溶液。

在电泳槽A内加入醋酸钡缓冲液，在槽架加入石油醚，将凝胶板置于电泳槽架上，于凝胶板负极端分别点样2μl，立即接通电源，在电压100V条件下，电泳约25分钟，关闭电源。

在电泳槽B内加入1,2-二氨基丙烷缓冲液缓冲液，在槽架加入石油醚，将凝胶板置于电泳槽架上，立即接通电源，在电压100V条件下，电泳约35分钟，关闭电源。

染色与脱色取下凝胶板，浸入0.1%w/v 鲸蜡烷三甲基溴化铵水溶液至少3小时；升温至60℃，再浸泡1小时，暖气吹干，直至形成透明薄膜；再将凝胶板浸入0.1% w/v 甲苯胺南的乙醇溶液-水-冰醋酸（100:100:2,v/v/v），浸泡20分钟使其染色，再浸入乙醇-水-冰醋酸（100:100:2,v/v/v）溶液使脱色。

不同组分的斑点在蓝色琼脂糖凝胶上均呈现深紫色，自电泳开始其运行次序如下：

含量测定：使用密度计对斑点面积进行定量测定，波长为600nm，衰退范围：0.250，裂缝：0.2×10mm，扫描长度：45/50nm，从密度计读数可直接获得各待测组分的含量，当快速移动肝素对照品含量为规定限度±10%范围内，试验方有效。供试品含快速移动肝素应为72%-88%，硫酸皮肤素应为12%-28%和慢速移动肝素不得过4%