药群论坛

标题: 方法开发缓冲盐选择指导原则 [打印本页]
作者: 静悄悄    时间: 2017-9-7 02:07 PM
标题: 方法开发缓冲盐选择指导原则
前言
! o) O# ^# G* g* s7 F液相方法很多用到缓冲盐，我在从事研发工作的过程中，发现很多同仁对缓冲盐在液相方法中的应用不是太了解，遂分享一部分我的看法，抛砖引玉，相互交流。6 ~* t2 w" y; o& E/ W8 B! l

, X% Y, F; R* `) N& u" y适用范围
: e, C0 \4 A0 N; a( A
! f; q1 `2 W1 Q( Q+ }/ v& q本指导原则仅适用于反向色谱与离子对色谱方法开发过程。! M, k: H. X# X
何时应用缓冲盐？
! u8 L2 M  h2 k( m' X( D& k- y  ?
样品或样品中需研究的关键杂质有离子化倾向，其他特定少数情况另行叙述。
8 O1 z' I, {+ [3 \3 D' G) l) F  `存在较强离子化倾向的组分，其中一部分是分子状态，与反相色谱固定相结合的更好；另一部分是离子状态，更亲和于流动相。如不使用缓冲盐控制其电离状态，即分子状态和离子状态的比例，很容易出现峰拖尾分叉变形的情况。这种情况下一般就不应该使用水/有机相系统作为流动相，应选用缓冲盐/有机相系统。
1 a, R; e. P5 N) M6 E缓冲能力与pH选择
9 I9 s* n/ B; `4 ]6 I
  W. ^& l! u7 t/ t5 H9 \流动相如用到缓冲盐溶液，其应当有一定的缓冲能力，如果减少进样量，峰形改善，则说明很可能缓冲盐溶液缓冲能力不足。缓冲盐溶液的缓冲能力与缓冲盐浓度、缓冲盐溶液的pH值相关。缓冲盐浓度越大，缓冲能力越强；缓冲盐溶液的pH值越接近其pka，缓冲能力越强。一般缓冲盐溶液的pH值应在其pka±1的范围内，为了确保主成分的保留时间不因pH值的微小变化产生大的偏离，缓冲盐溶液的pH值应在样品pka±2的范围外。: r3 w! l6 R- G2 S$ m
, z' a% a% f3 p5 B
截止波长1 B! Z9 A0 C8 f3 e$ F  b7 l2 x
3 I( P, `2 L# T& @4 T
每种缓冲盐都有其对应的截止波长，方法的检测波长不得小于缓冲盐溶液的截止波长。检测波长越接近流动相截止波长，基线噪音越大，响应值误差越大，组分响应值和灵敏度变小。
8 t% \- M3 c5 L1 b# e- _常用缓冲盐pka与截止波长列表
( F: T7 d  }( M! c1 E4 j+ N
- L; s( v$ }. Q2 b- U
缓冲盐
pka
缓冲范围
截止波长
磷酸盐
2.1
＜3.1
＜200nm(0.1%)
7.2
6.2-8.2
12.3
11.3-13.3
甲酸盐
3.8
2.8-3.8
210nm（10mM）
乙酸盐
4.8
3.8-5.8
210nm（10mM）
碳酸盐
6.4
5.4-7.4
＜200（10mM）
三乙胺
11.0
10.0-12.0
＜200（10mM）
三氟乙酸
≥2
1.5-2.5
210nm(0.1%)
( C' s3 E. w' S; E
缓冲盐应用一般思路4 }5 B. Z' X/ ~
( G3 M4 u+ J( r3 R/ s: {* f# I0 `
1、 缓冲盐浓度一般为10-50mmol/l。根据样品性质及进样量选择缓冲盐浓度，使其满足应有的缓冲能力。
1 M8 q6 E' ~8 \2 x6 e9 m" Q8 ?1 c8 z, q
2、 梯度洗脱中有机相比例允许的最高值，应根据缓冲盐与有机相混溶实验确定。取不同缓冲盐-有机相比例，确定有机相比例允许最高值，如缓冲盐：有机相为10:90、20:80、30：70等不同比例。不得在仪器上随意设置高比例有机相，以防缓冲盐析出损坏仪器。
) R4 @( U& R' _% @7 a& ?
: Z/ ?  Q" d4 a& X3、 根据截止波长、pH值和缓冲能力等多个约束条件选择缓冲盐，如检测波长在末端吸收，则一般应选用磷酸盐。
) n$ \+ w* E3 C1 a2 F( y* C: Z% [8 y* b
4、 常用缓冲盐溶液有：0.1%磷酸/三氟乙酸/乙酸/甲酸溶液，0.02-0.05mol/l 磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.0）等$ m7 i% g1 i+ u
1 K, _! @+ L" v8 J0 U4 @0 n5 \$ d" t: a/ n
5、碱性化合物优选钾盐，抑制拖尾效果更好。% ], B' ?( U& v: e3 v

6 p4 b- ?+ S7 p/ g( m$ u: ~* i& o: ~" _5 s
   作者：占小兵 上海博志研新药物技术有限公司
, L. N' N: k, V' s9 u* A! M
# O. V% s4 A2 |# g% T6 `3 D
作者: qqpsly    时间: 2017-9-7 07:31 PM
已学习，感谢分享！！
作者: 18296788742    时间: 2024-6-4 03:32 PM
6 \6 f* {6 i5 u# V! l+ t
已学习，感谢分享！！



欢迎光临 药群论坛 (http://www.yaoqun.net/) Powered by Discuz! X3.2