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标题: 方法开发缓冲盐选择指导原则 [打印本页]
作者: 静悄悄    时间: 2017-9-7 02:07 PM
标题: 方法开发缓冲盐选择指导原则
前言7 Z: ?9 O$ ~1 q+ j! E
液相方法很多用到缓冲盐，我在从事研发工作的过程中，发现很多同仁对缓冲盐在液相方法中的应用不是太了解，遂分享一部分我的看法，抛砖引玉，相互交流。
4 k/ e& C3 A% T2 N7 ?" c1 I$ h! N0 r# o: W* [8 v- ]8 k3 x
适用范围5 L2 {- m7 \4 ^* m/ x2 I: P
  m6 K5 Z1 q( T. s1 A
本指导原则仅适用于反向色谱与离子对色谱方法开发过程。
- f) }! n) H! i" @, M2 B* d何时应用缓冲盐？" }# \& [# j8 H* g$ M, q* Y
$ J6 `  _7 D, k0 X; i! o# I
样品或样品中需研究的关键杂质有离子化倾向，其他特定少数情况另行叙述。
- D0 B5 w4 x- A6 Z# X  M  d存在较强离子化倾向的组分，其中一部分是分子状态，与反相色谱固定相结合的更好；另一部分是离子状态，更亲和于流动相。如不使用缓冲盐控制其电离状态，即分子状态和离子状态的比例，很容易出现峰拖尾分叉变形的情况。这种情况下一般就不应该使用水/有机相系统作为流动相，应选用缓冲盐/有机相系统。. G# m' M3 Y" t* c- o# J/ e
缓冲能力与pH选择
5 Q- B1 W! W; K$ g4 a, v% D  T- s7 Q. v( @
流动相如用到缓冲盐溶液，其应当有一定的缓冲能力，如果减少进样量，峰形改善，则说明很可能缓冲盐溶液缓冲能力不足。缓冲盐溶液的缓冲能力与缓冲盐浓度、缓冲盐溶液的pH值相关。缓冲盐浓度越大，缓冲能力越强；缓冲盐溶液的pH值越接近其pka，缓冲能力越强。一般缓冲盐溶液的pH值应在其pka±1的范围内，为了确保主成分的保留时间不因pH值的微小变化产生大的偏离，缓冲盐溶液的pH值应在样品pka±2的范围外。
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截止波长
4 P' l. Q" r5 e
" P" l" U9 M6 k$ t1 ?0 f3 V每种缓冲盐都有其对应的截止波长，方法的检测波长不得小于缓冲盐溶液的截止波长。检测波长越接近流动相截止波长，基线噪音越大，响应值误差越大，组分响应值和灵敏度变小。' R# w6 v- k2 I3 E1 d
常用缓冲盐pka与截止波长列表) T7 [0 S( W% Y. Y6 E
! O+ P: M3 M; w0 u: K3 H5 A5 R: g* p
缓冲盐
pka
缓冲范围
截止波长
磷酸盐
2.1
＜3.1
＜200nm(0.1%)
7.2
6.2-8.2
12.3
11.3-13.3
甲酸盐
3.8
2.8-3.8
210nm（10mM）
乙酸盐
4.8
3.8-5.8
210nm（10mM）
碳酸盐
6.4
5.4-7.4
＜200（10mM）
三乙胺
11.0
10.0-12.0
＜200（10mM）
三氟乙酸
≥2
1.5-2.5
210nm(0.1%)
3 L8 T* z$ Y3 ^! g7 `: g
缓冲盐应用一般思路4 [+ k$ T6 K4 A
3 c7 b' v) F; a" g( ?' k$ I
1、 缓冲盐浓度一般为10-50mmol/l。根据样品性质及进样量选择缓冲盐浓度，使其满足应有的缓冲能力。
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8 ?6 w# J4 Y+ d' F1 p" B4 E2、 梯度洗脱中有机相比例允许的最高值，应根据缓冲盐与有机相混溶实验确定。取不同缓冲盐-有机相比例，确定有机相比例允许最高值，如缓冲盐：有机相为10:90、20:80、30：70等不同比例。不得在仪器上随意设置高比例有机相，以防缓冲盐析出损坏仪器。4 ?5 i. F& T/ f) P1 u5 n
* `/ M: v: O: d7 e. C/ Y: n
3、 根据截止波长、pH值和缓冲能力等多个约束条件选择缓冲盐，如检测波长在末端吸收，则一般应选用磷酸盐。
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4、 常用缓冲盐溶液有：0.1%磷酸/三氟乙酸/乙酸/甲酸溶液，0.02-0.05mol/l 磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.0）等
( E: P( p: i/ q! D$ Z6 t) H- g8 X% j& D2 M0 R; w
5、碱性化合物优选钾盐，抑制拖尾效果更好。
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- t4 g( k, M% c, P8 S+ {7 K4 o
   作者：占小兵 上海博志研新药物技术有限公司
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作者: qqpsly    时间: 2017-9-7 07:31 PM
已学习，感谢分享！！
作者: 18296788742    时间: 2024-6-4 03:32 PM
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