药群论坛

标题: 方法开发缓冲盐选择指导原则 [打印本页]
作者: 静悄悄    时间: 2017-9-7 02:07 PM
标题: 方法开发缓冲盐选择指导原则
前言
) b( h) A+ C  T$ r; D, a/ h液相方法很多用到缓冲盐，我在从事研发工作的过程中，发现很多同仁对缓冲盐在液相方法中的应用不是太了解，遂分享一部分我的看法，抛砖引玉，相互交流。
5 |) }( c% X$ X; h% d- r) `; G& f* k& H
适用范围
0 B7 b" {2 i( L' h( C5 }2 U  A( S# J4 |6 L) o
本指导原则仅适用于反向色谱与离子对色谱方法开发过程。
/ g, n- N+ k/ d: H何时应用缓冲盐？0 K7 t" X! y1 k/ h; H; [1 q
% q8 B* k: }/ ?, r6 m. O. I
样品或样品中需研究的关键杂质有离子化倾向，其他特定少数情况另行叙述。: d% P$ y  ]2 G, m3 |
存在较强离子化倾向的组分，其中一部分是分子状态，与反相色谱固定相结合的更好；另一部分是离子状态，更亲和于流动相。如不使用缓冲盐控制其电离状态，即分子状态和离子状态的比例，很容易出现峰拖尾分叉变形的情况。这种情况下一般就不应该使用水/有机相系统作为流动相，应选用缓冲盐/有机相系统。
. Z& t' V  B# a2 I$ I, W9 e2 W缓冲能力与pH选择
  f' C' h: I7 v8 f& x7 M! r: Q1 D9 T8 Z  w( x
流动相如用到缓冲盐溶液，其应当有一定的缓冲能力，如果减少进样量，峰形改善，则说明很可能缓冲盐溶液缓冲能力不足。缓冲盐溶液的缓冲能力与缓冲盐浓度、缓冲盐溶液的pH值相关。缓冲盐浓度越大，缓冲能力越强；缓冲盐溶液的pH值越接近其pka，缓冲能力越强。一般缓冲盐溶液的pH值应在其pka±1的范围内，为了确保主成分的保留时间不因pH值的微小变化产生大的偏离，缓冲盐溶液的pH值应在样品pka±2的范围外。
9 T* d% X1 @; ^% ^( o' [% |' W* N/ A
截止波长' `/ K$ Q4 u: n8 h8 Y7 ]
! D/ x* v- g/ h- C- o4 @
每种缓冲盐都有其对应的截止波长，方法的检测波长不得小于缓冲盐溶液的截止波长。检测波长越接近流动相截止波长，基线噪音越大，响应值误差越大，组分响应值和灵敏度变小。
/ ]: e7 m9 W) i( ]常用缓冲盐pka与截止波长列表
1 M7 X% z, I5 h, U" j/ S' A+ c
* V( t0 Y/ E4 W3 T( e6 `* O
缓冲盐
pka
缓冲范围
截止波长
磷酸盐
2.1
＜3.1
＜200nm(0.1%)
7.2
6.2-8.2
12.3
11.3-13.3
甲酸盐
3.8
2.8-3.8
210nm（10mM）
乙酸盐
4.8
3.8-5.8
210nm（10mM）
碳酸盐
6.4
5.4-7.4
＜200（10mM）
三乙胺
11.0
10.0-12.0
＜200（10mM）
三氟乙酸
≥2
1.5-2.5
210nm(0.1%)

; F9 U) f: i0 X$ K+ C5 q! x5 o9 C4 i; \缓冲盐应用一般思路
  e7 H0 q' [& n  a/ V0 ?3 O) g, D
1、 缓冲盐浓度一般为10-50mmol/l。根据样品性质及进样量选择缓冲盐浓度，使其满足应有的缓冲能力。& N6 R3 G  n" g
5 c' q' D7 o+ w# \: O: J
2、 梯度洗脱中有机相比例允许的最高值，应根据缓冲盐与有机相混溶实验确定。取不同缓冲盐-有机相比例，确定有机相比例允许最高值，如缓冲盐：有机相为10:90、20:80、30：70等不同比例。不得在仪器上随意设置高比例有机相，以防缓冲盐析出损坏仪器。
9 E" w& O2 ^4 n7 m2 S* g
1 h( Q+ F+ c! P$ t3、 根据截止波长、pH值和缓冲能力等多个约束条件选择缓冲盐，如检测波长在末端吸收，则一般应选用磷酸盐。' d% L4 q; x2 _+ y' n9 d) k% f- l
: A" F. J# Y7 S/ u
4、 常用缓冲盐溶液有：0.1%磷酸/三氟乙酸/乙酸/甲酸溶液，0.02-0.05mol/l 磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.0）等
$ M+ {% M* K3 a  O9 c& _& K0 {% G7 u2 q  s- W8 Y- p
5、碱性化合物优选钾盐，抑制拖尾效果更好。* |  k; E6 O0 T$ ?

6 v: u: J5 J  W) ~2 ^+ A& D+ Y; |* j& O% p0 |, ^2 p2 @
   作者：占小兵 上海博志研新药物技术有限公司
' n0 e  B/ j- f* Z8 `: V" n6 x. V. j$ M
作者: qqpsly    时间: 2017-9-7 07:31 PM
已学习，感谢分享！！



欢迎光临 药群论坛 (http://www.yaoqun.net/) Powered by Discuz! X3.2