【夯实基础】液相色谱定量分析原理

【夯实基础】液相色谱定量分析原理
! F" |3 p4 d/ |2015-05-21 仪器信息网
液相色谱定量分析原理
7 F7 Y. K# {7 k+ y% G/ u: o0 ~在定性的基础上定量,需有纯物质作为标准物液相色谱定量是相对定量的方法:即由已知量的纯标样推算混合物中被测物的量定量的依据是:

• 被测组分的量与响应值(峰高或峰面积)成正比
  
  

• 由已知量的标样可求得定量校正因子
  
  2 f7 U1 t; C' O7 A1 ^1 B

• 定量校正因子:是定量计算公式中的比例常数,其物理意义是单位响应值(峰面积)所代表的被测组分的量
  
  

• 测定未知组分的响应值,通过定量校正因子即可求得其含量
  
  

液相色谱定量分析的步骤

1、选择一个适合定量分析的色谱方法：

• 确认被检测组分峰,并达到分离度(R)大于1.5
• 确定被测组分色谱峰的一致性(纯度)
  
  
  

• 确定方法的检测限及定量限;灵敏度及线性范围
  
  
  

2、用不同浓度的标准样品建立校正曲线
) e8 R) V. s5 Z# L3、考查定量方法的准确度及精密度
" }0 q+ @/ ~* _8 J0 C5 ^0 E* h4、用相应的色谱管理软件实施样品采集,数据处理及报告结果
& A+ x+ Q; G0 E& \0 }鉴别需定量的色谱峰(定性)
# N6 O1 v6 k# o! o2 g定性鉴别每个要定量的色谱峰
- C0 Z/ V+ }# b! n首先用标样确定欲定量之色谱峰的保留时间(Rt)，通过比较保留时间,找到未知样中各色谱峰所对应的组份，色谱定性是用与标样比较保留时间的方法，判据并不充分进一步的确认(定性)1、标准加入法
# K! P. m: t5 v8 ^1 \9 s0 W2、同时用其它方法：其它色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱) 、其它检测器 （PDA：光谱图比较、谱库检索；MS：质谱图解析、谱库检索）3、其它仪器方法
确认定量峰的一致性
. Q# ~1 h! y9 N确认色谱峰的一致性(纯度)

• 保证每个色谱峰下只有一个被测的组份
  ; c8 F* x: ~8 X6 l
  
  

• 检查是否有共流出的物质（杂质）干扰
  3 [9 K/ V# t0 Z9 @: C( L
  
  4 Q9 q, ], P( ^. Z+ B3 U

色谱峰一致性(纯度)确认的方法
$ R) N* q7 Y$ Q) d

• 用光电二极管矩阵(PDA)检测器比较光谱图
  ) L/ J/ x- o8 Y) p, ]1 a2 ^
  
  

• 峰纯度鉴定
  
  
  * b& e8 S. I: J# G( d6 X" a$ x

• 2996的纯度角理论
  
  3 A5 p/ f! w+ f; _6 @- M

常用的定量方法
标准曲线法,分为外标法和内标法:
5 U. k3 s9 R, [& G4 b+ b* Q

外标法：在液相色谱中用得最多

内标法：准确，但是麻烦，在标准方法中用得最多

影响定量分析结果的因素

准确度不好可能由下述原因造成:

–峰面积积分不正确、样品分解或制样时导入杂质、样品瓶不密封,样品或溶剂挥发、制样不正确、进样问题、内标制备不正确

' G4 ^, I' w  C2 _- N

精密度不好可能的原因:

峰积分不正确、进样或进样器有问题、样品分解或制样时引入了杂质、色谱问题、检测器响应下降

文章来源：百度文库

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