自身对照法检测有关物质问题

    请教各位老师：我现在检测一个原料药样品有关物质，用自身对照法。杂质限度是单杂＜0.5%，总杂＜1.5%，自身对照溶液是将供试溶液稀释100倍。有两个问题：
   （1）供试品溶液稀释100倍后，主峰峰面积不成比例，按照峰面积计算，实际倍数为130左右。不同批次之间实际倍数差异较大，从120-180都有。
& ]& E6 G: z. h5 p% k/ ]: \( a! F" `& L, U   （2）用同一个供试品溶液，稀释4份平行样，峰面积相差较大，导致最终计算结果差异较大。
' O/ \* d' ^0 m5 j! P    请各位帮忙分析一下，谢谢！
    下面两个人分别操作得到的数。数据均为自身对照溶液主峰面积，并且是从同一个供试品溶液量取1ml并稀释100倍得到的。①②③④分别代表4个平行样，3个①表示该样品重复进样3次。

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1、有关物质下一般样品过载，峰面积与稀释倍数不成正比很正常，详见峰面积计算公式，越符合高斯分布的才越准，因此超载了本身就不准；
* J" q  F. P9 I9 O1 |3 U2、一个样品进样3次RSD不符合要求表示样品稳定性不好或者进样器有问题，建议先做样品稳定性排查，两个小时进一针，一个晚上掺杂着做结果就出来了；
3、发帖求助没有反馈很坑爹，吐个槽。

shandow 发表于 2016-11-22 09:56 AM
你们做过溶液稳定性的考察没有？从2、3、4号样来看是处于下降状态（如果你是按顺序制样进样的）
有可能在 ...

恩，感谢你的分析，打算先做一个自身对照的稳定性考察

jalary 发表于 2016-11-21 04:07 PM
3 y5 s! y( C; G7 B: Q* o0 W" L倍数问题是正常的，一般有关物质检查供试液浓度比较大，所以稀释后倍数不成比例。
6 g6 p# W8 F* }  R3 j+ s% J5 @至于重复性，3个1的数据 ...

( W0 z3 W, x% F( ?( `+ m/ T感谢分析，很有道理。准备仔细排查一下问题。

$ D  o) D/ z7 g" I  q你们做过溶液稳定性的考察没有？从2、3、4号样来看是处于下降状态（如果你是按顺序制样进样的）
7 i$ K! q3 A4 S  E' F有可能在高浓度时降解不明显，但在低浓度时降解速度较快（百分比），做一个自身对照溶液的稳定性试验找一下原因吧。
$ N/ F5 e- e* K/ d) v$ |自身对照溶液稀释时用的溶剂和浓溶液一样吗？如一样不用考虑溶解度的问题（浓的溶液能充分溶解），如不一样需要确定稀释后能充分溶解（做溶解度试验确证下）。
$ a% l  [# ^! K3 ]# T1号样两个人相差较大，是否同时制样后进样时间间隔较大，如二个人制样到进样的时间基本相等，需要考虑下操作上和玻仪上的误差，但相差近20%，操作和玻仪的误差说不过去。
0 D. J* I$ f' k因不知道你们品种和操作的具体信息，只能从数据上分析，直觉是溶液稳定性的问题。

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你的容量瓶和刻度吸管这些有没有经过校验？

倍数问题是正常的，一般有关物质检查供试液浓度比较大，所以稀释后倍数不成比例。
至于重复性，3个1的数据重复性不好，主要是仪器和积分参数的问题，后面同一供试液配制的对照差异性，主要是操作问题了，说明你仪器和人员操作都有点问题，仔细排查下。
" J1 z7 q( C6 R) C5 y除了这些因素外，我能想到的就是样品溶解性的问题了，供参考。