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一、含量方法学研究所需图谱(流动相、检测限和定量限参照有关物质,如有关物质和含量方法一致,可以只做进样精密度、溶液稳定性)4 y3 g- w8 w/ l9 n: u/ U
1、线性:包含60%、80%、100%、120%、140%,通常是5~7针,要求r.0.999。 `- `; t" \0 ?$ q+ k& O1 b
2、进样精密度:用对照品做,单样连续进六针,要求RSD<2.0%。
8 \: Z0 K6 X: e3 @3、重复性试验:双样双针,一个样进两针,六个样,两个对照,总共16针,要求RSD<2.0%。
; A: ] E# E) @' |3 R4、回收率(准确度):总共22针,分别做三个80%、三个100%、三个120%,一个样两针,两个对照四针,九个样18针,要求回收含量在98%~102%之间,RSD<2.0%。4 A* C: r; B) `$ N1 W5 f/ m; a
5、含量测定:总共28针,方法验证—两个对照品四针,仿制品两个样四针,小试样品两个样四针。中试样品三批—两个对照四针,一批双样四针,三批六个样十二针。
! U) i4 ]$ m7 Q6、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。7 X/ G, R F* l
7、专属性:空白辅料、空白溶剂、正常样、热破坏样、酸破坏样、酸液空白样、碱破坏样、碱液空白、光破坏样、氧化破坏样、双氧水空白样。共九针,需达到降解约20%,该杂质峰与其它峰应能完全分离,分离度不得小于2.0(已知杂质)。! B5 `& D$ P; y/ N7 P! z0 ]5 C
8、稳定性试验:包括加速0、1、2、3、6月30、40℃,长期3、6、9、12、24月,均做含量测定和有关物质。含量测定双样双针,一样两针,一批两样,三批六样十二针,两个对照四针。有关物质做空白
/ l I1 K- g, p溶剂,单样单针,100%样品、1%自身对照,共七针。8 A) j3 B" ^' A, J; X) [9 o: A0 o, A
二、有关物质方法学研究所需图谱
4 S, v% B) I; Q3 I1、波长扫描和流动相的选择:参照国家标准并根据欧洲药典、USP英国药典以及日本药典中收载的流动相做,取样品,配成一定浓度进样,进行比较确定,选取其中最合适的。确定流动相后,并驱样品、对照品以及国外上市样品,配成参考文献中的浓度,进样;
' j- R' E9 ?& F. w* o) i/ f- d要求:分离度达1.5以上,分析时间通常为主身份保留时间的2-3倍,分析时间长可考虑采用梯度洗脱,共 n+3张图谱
$ ?( h; G0 w0 @0 k) j系统适用性试验:配制6份相同浓度的杂质溶液进行分析,该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%,保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外,杂质峰的拖尾因子不得大于2.0,理论塔板数应符合质量标准的规定。(已知杂质)1 L% J% f/ K/ L0 g/ c9 n
耐用性:分别考察流动相比例变化±5%、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、检测波长变化±5nm、流速相对值变化±20%以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时,仪器色谱行为的变化,每个条件下各测试两次。可接受的标准为:各杂质峰的拖尾因子不得大于2.0,杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离;各条件下的杂质含量数据(n=6)的相对标准差应不大于2.0%,杂质含量的绝对值在±0.1%以内。2 E/ a% R( _) A5 K$ B1 W4 Q+ f
2、空白溶剂以及辅料干扰试验:取溶解样品用的溶剂,注入液相色谱仪,记录色谱图。观察溶剂图谱情况。并取样品、处方量的空白辅料按同样方法配成一定的浓度,进样,记录的谱图。看辅料是否有干
6 ?3 V' x: O) k- n, T扰。共三张图谱,辅料吸收峰面积相对于主峰<0.05%视为无干扰。 杂质定位:如有已知杂质并且杂质对照品可获得的,配制杂质对照溶液,进样,记录色谱图。共四张图谱。/ X* P n4 l; o$ H: w; T
3、专属性:正常样、热破坏样、酸破坏样、酸液空白样、碱破坏样、碱液空白、光破坏样、氧化破坏样、双氧水空白样。共九针,需达到降解约20%,该杂质峰与其它峰应能完全分离,分离度不得小于2.0(已知杂质)。: s6 ]; \; l0 v0 [3 G. k( i; n
4、检测限与定量限:检测限用稀释法—12个样12针。配制6份最低定量限浓度的溶液,所测6份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%,峰面积的相对标准差应不大于5.0%。检测限S/N>3,定量限S/N>10。
8 z% n# O: v1 l/ g4 i% R) w5、回收率(已知杂质):分别做三个80%、三个100%、三个120%,一个样两针,两个对照四针,九个样18针,要求回收含量在80%~120%之间,RSD<2.0%。各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间,如杂质的浓度为定量限,则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%,相对标准差应不大于10%。
" B% b. k6 r9 _: m' `6、线性:包含60%、80%、100%、120%、140%,通常是5~7针,要求r>0.999。截距在100%响应值的25%以内,响应因子的相对标准差应不大于10%。
1 v6 f9 k; ]4 e7、1%精密度:单样连续进六针,要求RSD<2.0%。( F5 Q. J4 h; ]- Z8 p8 | W# r
8、重复性试验(已知杂质):双样双针,一个样进两针,六个样,两个对照,总共16针,要求RSD<15.0%。
$ D* n6 V# n. @- D8 U- Z9、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。按照分析方法分别配置对照品溶液与供试品溶液,平行测定两次主成分与杂质的含量,然后将上述溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室(4℃)中,在1、2、3、5和7天时分别平行测定两次主成分与杂质的含量。可接受的标准为:主成分的含量变化的绝对值应不大于2.0%,杂质含量的绝对值在±0.1%以内,并不得出现新的大于报告限度的杂质。5 w) U7 o" |. W1 _+ e9 c% Y$ @( O
10、小试方法验证及被仿制品:被仿制品1%自身对照,被仿制品100%样品,小试100%,小试1%自身对照。方法验证:中试样品三批,100%样品和1%自身对照,空白溶剂。
+ M" ?$ `% _4 `11、注明:主峰图谱要求——拖尾因子0.95≤r≤1.05,分离度最好要求1.5,理论板数一般不低于3000.(个别品种需根据实际要求而定)。" a, |7 O. g& K9 e0 s
三、聚合物方法学研究图谱; F- k+ W7 R; X! [. s4 F
1系统适应性试验(水和磷酸盐缓冲液):蓝色葡聚糖2000和对照品,理论塔板数要求不低于700。9 N/ ^& v) L( Z8 M& N; d
2、空白辅料7 E& t5 V% I7 Q. r! ^& P0 R+ {
3、供试品
1 Y. g. |; k4 g9 ?- o4、专属性试验:供试品,辅料干扰。* W* Z: a3 `# K/ M, v' n! @4 `: s' _
5、检测限与定量限:般以信噪比3:1相应浓度确定最低检测限,以检测限×1000的量或浓度作为测定量(浓度)
) E7 T# l G' l o6、1%进样精密度:单样连续进六针,要求RSD<2.0%。
7 A4 e2 l; y: p2 h$ P5 {$ E7、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。+ r' i8 P: j3 G( t% x2 ~/ [7 {
8、线性:(浓度范围20%-200%)7个样。3 Z4 a% v3 ] w
供试品溶液的浓度与聚合物测定结果的相关性考察:制备系列的供试品溶液,浓度范围为规定浓度的50%~200%,共三份样品,以测得的高聚物峰面积对溶液浓度进行线性回归,相关系数r应大于0.99。 F值测定的重现性考察:F值为对照溶液的浓度(mg)与测得的峰面积的比值,要求日内、日间的相对标准偏差在5%以内。
) g8 g5 |, ?( o2 ~+ B& y对照品 d2 R, M0 Z; H3 Q/ m' L5 Q7 g
20%
. r+ \* F- s& ?7 X$ M50%
' }( m7 n; q7 g# P9 f80%
0 c5 m+ o- P8 p100%* m- k& F0 i8 [' q
120%5 ?7 s- j+ t5 \+ P+ u7 O: s2 E
150%
: d3 t: r' @, ^4 @200%
" Q* A+ u8 s: Z! {: x4 S9、聚合物测定(方法验证)- K% `+ o& w( o4 Y
四、影响因素五天和十天:分别作含量测定和有关物质4 \4 c+ I" U% H1 W- H; z
含量测定双样双针,一样两针,高温,高湿,强光、对照品。 有关物质单样单针,100%样品、1%自身对照,空白溶剂。
4 G0 b/ L+ T8 z6 G2 J) Y0 b' M0 m! L( k: H% T- H) K( u3 t
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