药群论坛

 找回密码
 立即注册

只需一步,快速开始

查看: 1201|回复: 5
打印 上一主题 下一主题

[仪器分析] 色谱峰保留时间变化常见原因和解决方法

[复制链接]
跳转到指定楼层
楼主
静悄悄 发表于 2015-1-29 19:51:28 | 只看该作者 回帖奖励 |正序浏览 |阅读模式

马上注册,结交更多好友,享用更多功能,让你轻松玩转社区

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?立即注册  

x
色谱峰保留时间变化常见原因和解决方法2015-01-29[url=]沃特世[/url]7 P* J: C# U: O
确定色谱峰保留时间不稳定的原因首先需要找出变化的模式。
保留时间在多次进样间随机变化
4 y& O/ f' \' }. U
建议首先检查泵和溶剂混合装置。校验泵是否工作正常,可以用量筒和秒表来测量流速。校验流动相组成没有变化,可以在流动相中加入跟踪剂来观察基线的变化。如果流动相组成是稳定的,基线也应该很稳定。如果流动相组成有变化,你会观察到基线的相应变化。举例说明,如果你使用反相条件,UV检测器,可以在有机相溶剂中加入0.1%的丙酮,监测254 nm下的基线变化。另一种方法也可以,你需要人工配制流动相,然后通过溶剂混合装置。如果保留时间的变化消失了,问题就出在溶剂混合装置上。
* A) x* v6 M' E6 T  K
一天之内的进样保留时间一致,但是不同天数之间的保留时间变化
( g+ q7 t, s. h3 x: @" j, L( A
这种情况下,仪器本身不太可能有问题。保留时间变化最有可能的原因是流动相组成的变化。在反相色谱中,保留因子k和流动相中有机溶剂的体积含量成指数关系。根据经验,如果有机溶剂含量误差1%,那么保留时间的变化在5%到15%之间,典型情况在10%左右。建议仔细称量有机溶剂,最好的配制流动相方法是用质量称量代替体积称量。' f+ c  `+ z; L6 ?5 }* V
此外,流动相如何脱气也可能导致保留时间的变化。最好的脱气方法是使用真空超声脱气大约一分钟左右,这会最大程度的减少溶剂蒸汽的挥发。另一个方法是用氦气流喷射,在流动相被氦气平衡后,氦气流必须被关闭,否则氦气会带走溶剂蒸汽,溶剂的组成会由于蒸发而发生变化。0 T6 b3 Y) r1 p3 x0 X8 `
如果样品组成是离子状态或者离子化的,那么控制流动相的pH值非常重要。小到0.1单位的pH变化会导致保留时间漂移10%左右。所以准确测量pH值并保证pH仪被很好地的校准。在反相色谱中,随着流动相pH值的升高,酸保留时间会减少,碱的保留时间会增加。. ~% Y- b6 O" `8 r
化学老师常说“缓冲溶液之所以被称为缓冲溶液,因为它是用来缓冲pH 值的。如果它做不到,那就不能称之为缓冲溶液”。举个例子,醋酸铵溶液只是醋酸铵溶液,醋酸缓冲液包括醋酸根离子和醋酸,如果它们的当量相同,此时的pH值就是醋酸缓冲溶液的pK值4.75。缓冲溶液在它的pK值上有最大的缓冲能力。
8 ~9 o9 x; e/ Y8 m1 u; U# W$ q& r5 C' z( p
色谱峰保留时间朝同一个方向漂移
6 `4 R6 s* G  P! u1 z; T1 O
如果所有色谱峰的保留时间都朝同一个方向漂移,很可能是温度原因所致。根据经验,每℃的变化导致保留时间变化大约1%到2%左右。在通常情况下没有什么问题,但是在许多地方空调和暖气在周末的时候会关闭,然后会出现样品在周末的保留时间会和平时不一样。使用柱温箱可以很好的避免这个问题。5 f' f* H2 U0 p; C) H' j  c% r1 s
其它原因) ]- w4 q& J9 |- @1 B& T8 u2 s
在反相色谱中,如果分析离子或离子化的样品,保留时间会受到缓冲溶液的离子强度的影响,但是影响会很小,通常可以忽略不计。典型的状况是缓冲液的摩尔数改变20%,保留时间变化约1%。由于缓冲液组分通常是称量的,那么大的误差是不会发生的。* W, g: L1 q0 }& f
在离子对色谱中,离子对试剂的浓度会影响离子化样品的保留。与离子对试剂电荷相反的分析物保留时间会增加,相同电荷的保留时间减少,中性化合物基本不受影响。在低浓度下,例如小于5 mM/L,样品组分保留时间的变化受与离子对试剂浓度影响,与离子对试剂的浓度成正比。在高浓度离子对试剂下,例如10 mM/L左右,填料表面被离子对试剂饱和,那么试剂浓度的改变不会对样品保留时间有明显的影响。这是在方法开发时需要考虑的问题。如果你需要把方法做到不受任一个变量的影响,那就应该那么做。
5 B& i7 \; E$ |5 ~' k; [  |! G
在正相色谱中,保留时间对流动相中极性组分的浓度非常敏感。这个组分无论是你需要还是不需要的,通常是指水。水含量的变化会导致保留时间的变化,比较好的解决办法是使用半饱和的非极性溶剂,例如正己烷或二氯甲烷。为了达到半饱和状态,通常需要往一定体积的溶剂中加一些水,搅拌一段时间使其饱和,然后把它和等体积的“干燥”溶剂混合。通过这个过程,理论上能让你在使用含水非极性溶剂时得到比较好的重现性,避免保留时间的漂移。

8 y, o% ~. U) j+ v+ g
- V0 x* a0 M6 B+ \  h6 d
回复

使用道具 举报

5#
asyangfei 发表于 2015-2-5 15:13:48 | 只看该作者
学习了,谢谢分享!!
回复 支持 反对

使用道具 举报

地板
日月当空 发表于 2015-1-30 08:37:58 | 只看该作者
谢分享,学习了
回复 支持 反对

使用道具 举报

板凳
hycwq77 发表于 2015-1-30 08:34:03 | 只看该作者
很好,学习了。
回复 支持 反对

使用道具 举报

沙发
zzt2414 发表于 2015-1-29 20:44:55 | 只看该作者
总结的不错,收藏。。。谢谢楼主分享,辛苦了!!
回复 支持 反对

使用道具 举报

您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册  

本版积分规则

QQ|手机版|药群论坛 ( 蜀ICP备15007902号 )

GMT+8, 2025-7-10 01:32 PM , Processed in 0.095696 second(s), 19 queries .

本论坛拒绝任何人以任何形式在本论坛发表与中华人民共和国法律相抵触的言论! X3.2

© 2011-2014 免责声明:药群网所有内容仅代表发表者个人观点,不代表本论坛立场。

快速回复 返回顶部 返回列表