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6 V- y/ W3 ?) \2 R在操作高效液相色谱时,有没有为老是出现气泡而崩溃?有没有为超声波震荡了一个小时,流动相还出现气泡,而晕倒?有没有为天气晴好的时候没出现气泡,阴天、下雨天,同一瓶,出现了气泡,而对自己的工作失去信心? 1 w/ b( D% _9 X# @; v
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在操作高效液相色谱时,流动相出现气泡,那整个工作就没法进行了。 & z4 h* E( {, s5 E3 [
- F) U) q/ F# b" I f7 r+ ?超声波震荡了一个小时的流动相,为什么天气晴好的时候没出现气泡,阴天、下雨天就会出现;是因为阴天、下雨天空气气压下降,引起溶在流动相中的空气过饱和(晴天时气压高还没饱和),当高压泵抽取流动相时,空气析出,产生了气泡。
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3 e9 o8 h( d! l# u0 J' a3 A超声波震荡了一个小时的流动相,为什么里面还有空气呢?这是由于在常压下震荡,驱赶空气效果不行。
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如果把装流动相的瓶子进行抽真空,同时进行超声波震荡,效果会怎么样呢?效果非常好,只要1min,流动相中的空气差不多没了;经过这样驱逐空气的流动相,阴天、下雨天使用也不会出现气泡了;而且省时,不用动不动半小时、一小时超声波震荡;并且效果非常好。 + w) B% j6 \' B* C
% H6 L4 h3 I, x1 I1 ?7 L0 D/ y( \由于气泡的存在,会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰,严重时会造成分析灵敏度下降;气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定,使基线起伏。
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造成上述现象的主要原因有三条: 8 v: y# P9 S% I% m8 D
一是流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡;
* f& i/ Y$ O8 y9 p6 E1 E8 m二是系统开始工作时未能将流路中的空气驱赶干净; ; O/ Q; R; W7 k2 ~: a
三是在注入样品时不注意混入了空气。
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' M7 w) L0 C; A/ h2 G而液相色谱仪在使用中,整个液路系统有两个地方易产生气泡! 0 o# l& W; i* W
1、泵头吸液白管;2、检测口流通池。 ; l2 R! X$ M& O
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气泡产生的原因大多数是因为:
: K% Y; e% e, H6 U( L0 A温度上升,压力下降!温度上升或柱温上升,当接近试剂沸点时,试剂汽化产生气泡,试剂中已含微小气泡,因加热变大而产生气泡。
+ c# s4 {. W* a& v4 Y0 E2 [压力下降产生气泡,流动相中一直包含微小气泡,无论超声过滤,均不能池底去掉它,那么当压力下降时,微小气泡将长大,且多个小气泡易聚集成大气泡,而影响正常实验。
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气泡产生原因及解决办法: 2 j$ r9 \: i1 ~& |4 d9 d( y
$ u# l! @% n- l# y一、泵头及吸液白管。
. f- v0 `' s6 C- f- b7 o* l1、泵头:泵头是压力变化最剧烈的地方,也是最易产生气泡的地方,泵头靠负压而吸液,而负压必然使流动相中的小气泡长大,当泵腔变正压时,已长大的气泡未必能全部变小流入后续液路,则泵腔内将积存气泡,从而影响吸液精度,鉴于此,泵头上专门设计了排气阀,便于泵头排气,观察柱压稳定了说明泵头排气成功。
8 Q9 Q$ H9 B0 S, t2、吸液白管长气泡。
) u& l+ y) ?, I) ~+ E2 qa、吸液白管接触空气部位漏气,产生可见气泡,吸液白管是常压和负压交臂变化部位,其漏表现为大气进入白管内,而不易见到管内液体漏出。
7 d0 N/ B+ ^$ {% w% j- W处理方法:更换白管。 - B" A _( ?& S. ?
b、滤头堵:滤头堵使得液体流入滤头的速度下降,泵强制吸液而产生真空气泡。
) B$ u+ J. o2 ~; v, p$ s0 e3 l判断:拔掉滤头不再长气泡则是滤头堵。
1 }8 J1 l' }& t8 J. w处理:A、30%硝酸水液超洗滤头,20分钟左右。 B、水超洗滤头,注意换水多超几次。 / e! F- A* b& L1 x
c、流动相汽化产生气泡。 / ]5 L: g f9 [* Y7 `( H) n0 W/ g
尤其是夏天室温高,沸点低的试剂易汽化,比如:乙酸,乙醚,氨水,石油醚等易于汽化。
2 }# u! I! y( N4 x1 f处理:超声,降室温。 : i# [9 G- M e# P9 l$ n
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二、检测流通池长气泡
; i/ {; `! l; g3 E. |$ X流通池是易积存气泡的地方,其对基线影响巨大,流动相流入色谱柱后,压力越来越小,微小气泡将逐渐长大,而流通池截面积远大于钢管面积,则气泡在池内易长大,气泡的特点是长大在无外压的情况下,很难缩小到钢管内经以下流出流通池,所以它就存在了池内。 处理方法:1、对于示差检测器(示差检测器池只能耐几个公斤压力),只能是反复冲洗斥资,举高废液瓶靠废液管内液柱给池加一个微小反压,所以这就靠成了示差池子排气困难些,但无它法。
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( A. \: i3 e+ q) }4 K8 D为了避免这类问题的出现,液相色谱实际分析过程中必须重视对流动相进行脱气处理。
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/ s1 j4 ~# f7 v常用的脱气方法有以下几种:
$ Q* m/ |4 F B5 M1. 吹氦脱气法 使用在液体中比空气溶解度低的氦气,在0.1Mpa压力下,以约60ml/min流速通入流动相10-15min以驱除溶解的气体。此法使用于所有的溶剂,脱气效果较好,但在国内因氦气价格较贵,本法使用较少;
- [. n% r1 b; M+ A. a2. 加热回流法 此法的脱气效果较好; * |! z; `- J/ n l6 ~0 j- k9 m
3. 抽真空脱气法 此时可使用微型真空泵,降压至0.05-0.07MPa即可除区溶解的气体。显然使用水泵连接抽滤瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成过滤机械杂质和脱气的双重任务。由于抽真空会引起混合溶剂组成的变化,故此法适用于单一溶剂体系脱气。对多元溶剂体系应预先脱气后再进行混合,以保证混合后的比例不变。 6 e( {# q5 }) j2 m- L
4. 超声波脱气法 它是目前实验室使用最广泛的脱气方法,将配制好的流动相连同容器一起放入超声波水漕中脱气10-20min即可。该方法操作简便,基本能满足日常分析的要求。 . B. Y3 x: M2 o0 E0 O0 ]
5. 在线真空脱气法 把真空脱气装置串联到储液系统中,并结合膜过滤器,实现了流动相在进入输液泵前的连续真空脱气。此法的脱气效果明显优于上述几种方法,并适用于多元溶剂体系。 7 C: \ _# @! x1 C, m
其二,在液相色谱系统开始工作前,可以用注射器连接恒流泵的排空阀,抽入流动相,将流路中的空气驱赶干净。 1 W0 S+ v5 Y( _) y; e
其三,在注入样品前注意排出样品注射器中的空气。 9 \: l* @- Q4 U& T
' H7 [% o" a5 U本文来源于网络,由实验与分析编辑整理转载请标明出处! ( g7 S0 {! J. Y
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