单抗药物多方面知识汇总

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xiaoxiao 发表于 2017-2-6 13:45:58 | 只看该作者回帖奖励

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单抗药物多方面知识汇总
春节假期结束了，小编没闲着对这块知识小编整合汇总下，8 T8 a: G1 ^* A. p7 Y6 t! B1 {
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1、单克隆抗体的基本概念

抗体（antibody）是由抗原刺激机体后所形成的一类具有与该抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白（immunoglobubin，Ig）。已知有IgG、IgA、IgM、IgD和IgE等5类免疫球蛋白，它们普遍存在于生物体内的血液、体液、外分泌液及某些细胞（如淋巴细胞）的细胞膜上。

1963年Porter对IgG的化学结构提出了一个由4条肽链组成的模式图。所有IgG的基本结构单位都是由4条多肽链组成的。两条相同的长链称为重链（H链），通过二硫键连接起来，呈Y字型。两条相同的短链称轻链（L链），通过二硫键连接在Y字的两侧，使整个IgG分子呈对称结构。

在多肽链的羟基端(C端)，占轻链的1／2与重链的3／4区段，氨基酸的数量、种类、排列顺序及含糖量都比较稳定，称为不变区或稳定区(C区)，而在氨基端(N端)轻链的l／2与重链的1／4区段，氨基酸的排列顺序可因抗体种类不同而有所变化，这部分称为可变区(V区)。可变区决定抗体的多样性与特异性，与结合抗原的特异性有关。轻链的C区称作CL，V区则称为VL；重链的C区称作CH，V区则称为VH。$ `8 H- `% R0 P2 g+ _ I3 m! i

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图1 免疫球蛋白基本结构

免疫球蛋白分子可以用蛋白水解酶裂解成较小的片段，木瓜蛋白酶可将免疫球蛋白裂解为 3 个片段，其中两个相同的片段，称 Fab 片段即抗原结合片段，各含有一个抗原结合部位可与抗原结合，从而可解释 IgG 抗体分子具有的抗原结合价为二价。Fab片段含有完整的轻链和重链的上端；另一个片段含有两个重链的下端，在抗原结合时不起作用，易结晶，命名为Fc片段，即可结晶片段。此片段不与抗原结合，而与补体结合并与凝集反应、组织致敏和穿过胎盘等活性有关。

免疫球蛋白分子同时也可以被胃蛋白酶裂解为多个片断。其中有两个较大的片断：F(ab’)2和 pFc’。 F(ab’)2片断与抗原结合，表现为 2 价，也可以表现出凝集反应或沉淀反应。pFc’却丧失了生物学活性。

传统上，将抗原物质免疫动物，由于这些物质由多种抗原分子组成或由多种抗原决定簇组成，可刺激不同淋巴细胞克隆，产生多种抗体，即多克隆抗体，由于这种抗体是针对多种抗原决定簇，特异性不高，易出现交叉反应，其应用也受到限制。

由单一B细胞克隆针对某一抗原决定簇产生的完全均一的只对某一抗原决定簇起反应的特异性抗体，即为单克隆抗体，习惯上被成为单抗。

单抗的产生离不开单一的 B 淋巴细胞克隆，不同的细胞克隆可能编码并且表达不同的抗体基因。为了获得已知特定抗原的单克隆抗体，应该首先筛选出这一株单克隆 B 淋巴细胞系，然后将筛选出的细胞系扩大培养，就有可能得到大量的单克隆抗体。

单抗由于具有纯度高、特异性强、效价高等特点，已广泛应用于生命科学的各个领域。例如，作为诊断试剂用于许多血清学检测; 临床上，已用于抑制同种异体移植排斥反应或治疗自身免疫病，或与核素、毒素、化学药物偶联导向药物，用于肿瘤治疗等。

参考文献：

[1]http://shiyan.ebioe.com/4985.htm

[2]http://www.biox.cn/content/20050415/10700.htm

[3]http://www.51protocol.com/pro/immu/20071114/41341.html

[4]http://baike.baidu.com/view/436301.htm

2、全球单克隆抗体药物获批上市情况分析

自1986年第一只单抗进入市场以来，截至2013年，经美国FDA批准上市的单抗药物一共有46种，进入临床试验阶段的单抗则接近220多种，治疗范围涵盖肿瘤、自体免疫疾病、治疗器官移植排斥反应、抗感染、止血、呼吸道疾病等，其中又以肿瘤和自体免疫疾病药物市场最大，种类最多。2010年肿瘤和自身免疫抗体药物占据整个单克隆药物市场76%的份额。此外，抗体还应用于病毒感染、心脑血管、骨质疏松等领域。

在已批准的抗体药物中，抗肿瘤药物占42.5%，免疫性疾病药物占32.5%，器官移植药物占7.5%，心血管疾病药物占7.5%，感染性疾病药物占2.5%，其他药物占7.5%。( O/ |+ e5 S# F' }0 H* U' \0 h& \
图1：全球已批准单抗药物-治疗领域分类6 |( g/ l) R' Q0 E! L

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) S: K' q% }* v# v- ~- B 国际批准的抗体药物中，主要靶点有二十五个，包括CD20、CD25、CD33、CD52、CD6、CD3、CD11a、Her2、GpIIb/IIIa、呼吸道合胞体病毒F蛋白、人表皮生长因子受体-2（Her2）、肿瘤坏死因子alpha（TNFα）、VEGF（血管内皮生长因子）及EGFR（表皮细胞生长因子受体）等。1 ?. M% `) E0 v# r, L# Z
抗体药物治疗因其靶向、低毒、疗效好、能杀灭对化疗药物不敏感或耐药的肿瘤细胞，在与化疗药物联用时取到了良好的疗效，因而发展迅速，逐步的成为部分肿瘤领域一线治疗选择。
; F+ f# n0 i* F0 b2 w 1997年，FDA批准美罗华（利妥昔单抗）用于非霍奇金氏淋巴瘤；1998年赫赛汀（曲妥珠单抗）用于Her2阳性的乳腺癌治疗。至2013年2月，FDA共批准14个抗肿瘤单抗。2013年FDA批准Genetech抗体偶联抗癌药（ADC）Ado-trastyzymabemtansine上市，用于HER2转移性乳腺癌的治疗，为晚期HER2转移性乳腺癌患者提供了新的治疗选择。
% i% @( C/ I/ o2 h" W4 [. H9 ? 抗肿瘤单抗主要分为三大类、10个靶点：
$ W1 d2 [4 [: w2 @2 y6 ?8 O 以血管内皮生长因子(VEGF)为靶点的单抗，贝伐珠单抗抗血管生成作用，多用于治疗结直肠癌；
: `& d; z/ Q" R4 J1 O, Y 以表皮生长因子受体(EGFR)家族为靶点的单抗，如抗EGFR单抗（西妥昔单抗、帕尼单抗、尼妥珠单抗），抗Her2单抗（曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、TDM1）用于治疗结直肠癌、乳腺癌、胃癌等实体瘤。5 e/ G2 Q- @% R. m& k, p8 }
以白细胞分化抗原CD分子为靶点的单抗，如抗CD20、CD30、CD52等单抗，多用于治疗白血病和淋巴瘤；利妥昔单抗等。
4 v: ]. |8 R! T4 {3 e: @  X 表1：单抗药物作用靶点与主要抗肿瘤适应症
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5 i2 H' Q8 B: h: e' H  L0 u) K 表2：1994-2013年FDA批准的抗肿瘤单抗药物' e' m0 z  I9 ^' o. ?7 i

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由于肿瘤坏死因子TNF-α和白细胞介素体内浓度异常导致了自身免疫性疾病的发生，因此抗TNF-α和白细胞介素开创了治疗相关重大疾病的崭新时代，可有效治疗和延缓上述疾病的发展。依那西普、英夫利昔、阿达木单抗、赛妥珠和戈利木是目前已上市的中和TNF-α的抗体，它们对氨甲喋呤治疗反应不足的活动期的风湿性关节炎患者，无论是单独用药，还是与氨甲喋呤联合应用，均能显著提高患者对治疗的反应，临床上有抑制关节进行性损伤、缓解症状、促进关节物理功能等效果。
) J: T0 {# ?; b+ K2 R- T( e2 u 另外，抗CD20抗体美罗华联合氨甲喋呤，用于对其他TNF-α拮抗剂治疗无效的活动期的成年人重度风湿性关节炎病例时，具有很好的疗效。
3 J2 u4 _$ {  l) ]$ Z3 U- R 表3：FDA批准的治疗自身免疫性疾病的单抗药物
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FDA批准的用于其他治疗领域的单抗药物中，器官移植药物占7.5%，心血管疾病药物占7.5%，感染性疾病药物占2.5%，其他药物占7.5%。单抗药物在抗骨质疏松、老年病眼科的黄斑变性等疾病也有较好的疗效。
9 c1 @6 h2 J8 v+ C$ C& A 表4；FDA批准的器官移植抗排斥、病毒感染、心脑血管、骨质疏松等疾病的单抗药物

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3、那些让人晕头转向的“单抗”，你知道多少？

近年来，随着肿瘤免疫调控机制的逐渐清晰和基因改造技术的不断提高，肿瘤的治疗不再禁锢于传统的手术和放化疗，靶向治疗、免疫治疗等纷纷在肿瘤领域占得举足轻重的地位，同时一大波“单抗”药物也随之蜂拥而至，令人目不暇接。这些光名称就让人晕头转向的“单抗”，你知道多少呢？

1. 西妥昔单抗（爱必妥）

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靶点：EGFR

适应症：（1）适用于KRAS野生型、EGFR表达的转移性结直肠癌。联合FOLFIRI时可作为一线；联合伊立替康可治疗单用伊立替康化疗难治的病人；单药治疗针对奥沙利铂和伊立替康为主的化疗已经失败了，或者对伊立替康不耐受的病人。

（2）头颈部鳞状细胞癌。联合放疗可作为局部晚期的初始治疗；联合铂类为主的治疗再加上5-FU可作为复发或转移性疾病的一线治疗；如果单药适合铂类治疗已经失败了的复发或转移性的疾病。

剂量用法：推荐起始剂量为400mg/m2，滴注时间120分钟，滴速应控制在5ml/min以内。维持剂量为一周250mg/m2，滴注时间不少于60分钟。提前给予H1受体阻断剂，对预防输液反应有一定作用。使用前勿振荡、稀释。

2. 帕尼单抗（Vectibix）

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第一个完全人源化单克隆抗体，其靶向作用于表皮生长因子受体（EGFR）。2005年7月，Panitumumab获得FDA快速通道审批资格。2005年底，安进公司及其合作伙伴Abgenix公司共同向FDA提交了该品生物制剂许可申请，用于治疗化疗失败后转移性结直肠癌。

靶点：EGFR

适应症：（1）Vectibix是一种表皮生长因子受体拮抗剂，适用于单药治疗氟嘧啶[fluoropyrimidine]，奥沙利铂[oxaliplatin]，和伊立替康[irinotecan]化疗方案后疾病进展的转移结肠癌。
) Y+ }- t* p, n3 v: m（2）转移结肠癌试验的回顾性子组分析对在密码子12或13内有KRAS突变肿瘤患者未曾显示治疗效益，有这些突变结肠直肠癌的治疗不建议使用Vectibix。

剂量用法：每14天给予6mg/kg，60分钟内静脉输注(≤1000 mg)，大于1000mg用药时间应大于90分钟。

3. 曲妥珠单抗（赫赛汀）

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靶点：HER2

适应症：（1）HER2过表达淋巴结阳性或阴性乳腺癌的辅助治疗。作为治疗方案的一部分，包括阿霉素，环磷酰胺以及紫杉醇或多西他赛；也可以联合多西他赛和卡铂；在蒽环类为基础的治疗之后可以单药使用。

（2）HER2过表达转移性乳腺癌。联合紫杉醇一线使用；单药治疗适用那些已经接受过一种或多种方案的转移性疾病。

（3）HER2过表达转移性胃癌或食管胃结合部癌，之前未接受过针对转移性疾病的治疗，可联合顺铂和卡培他滨或5-FU。

剂量用法：作为单一药物或与其它化疗药合用时建议按下列初次负荷量和维持量给药。建议初次负荷量为4 mg/kg，90分钟内静脉输入。应观察病人是否出现发热，寒战或其它输注相关症状。停止输注可控制这些症状，待症状消失后可继续输注。维持剂量建议每周用量为2 mg/kg。如初次负荷量可耐受，则此剂量可于30分钟内输完。

4. 帕妥珠单抗（Pejeta）

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靶点：HER2

适应症：HER2阳性转移性乳腺癌，之前未接受过抗HER2治疗或化疗，或化疗后HER2+的转移性乳腺癌患者，应联合曲妥珠单抗和多西他赛使用。

剂量用法：初始剂量为840mg，历时60min静脉输注完毕，之后每三周420mg，历时30-60min静脉输注。

5. 贝伐珠单抗（安维汀）

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靶点：VEGF

适应症：（1）转移性结直肠癌。联合静脉输注5-FU为基础的化疗进行一线或二线治疗；一线含贝伐珠单抗方案治疗进展后，联合氟尿嘧啶为基础的化疗进行二线治疗。

（2）晚期非鳞状非小细胞肺癌。联合卡铂和紫杉醇治疗之前未接受过治疗的晚期病人。

（3）转移性肾癌，和IFN-α联用。

（4）恶性胶质瘤，初始治疗后疾病进展时使用，单药使用。

剂量用法：贝伐珠单抗应该由专业卫生人员采用无菌技术稀释后才可输注。贝伐珠单抗采用静脉输注的方式给药，首次静脉输注时间需持续90 分钟。如果第一次输注耐受性良好，则第二次输注的时间可以缩短到60 分钟。如果患者对60 分钟的输注也具有良好的耐受性，那么随后进行的所有输注都可以用30 分钟的时间完成。建议持续贝伐珠单抗的治疗直至疾病进展为止。

6. 伊匹单抗（Keytruda）

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靶点:CTLA4

适应症：不可切除的或转移后黑色素瘤。

计量用法：每3周给予静脉输注，剂量为2mg/kg给药，30分钟输完，直至疾病进展或不可接受毒性。

7. 利妥昔单抗（美罗华）

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靶点：CD20

适应症：（1）非霍奇金淋巴瘤。复发或难治性，低度恶性或滤泡型，CD20阳性B细胞NHL，单药治疗；之前未接受过治疗的滤泡型CD20阳性B细胞NHL，联合一线化疗；利妥昔单抗联合化疗让病人达到完全或部分缓解后，单药维持治疗；疾病未进展、低度、CD20阳性B细胞NHL在一线CVP化疗后使用利妥昔单抗单药治疗；之前未经过治疗的弥漫性大B细胞CD20阳性NHL，联合CHOP或其他蒽环类为主的化疗方案。

（2）慢性淋巴细胞白血病。之前接受过或未接受过治疗的CD20阳性病人，联合氟达拉滨和环磷酰胺

剂量用法：作为成年病人的单一治疗药，推荐剂量为每平方米体表面积375 毫克，静脉给入，每周1次，共4次，并适合门诊用药。滴注本药60分钟前可给予止痛药(如醋胺酚)和抗过敏药(如盐酸苯海拉明)。推荐首次滴入速度为50 毫克/hr，随后可每30分钟增加50 毫克/hr，最大可达400 毫克/hr。如果发生过敏反应或与输液有关的反应，应暂时减慢或停止输入。如病人的症状改善，则可将输入速度提高一半。随后的输入速度开始可为100 毫克/hr，每30分钟增加100 毫克/hr，最大可达到400 毫克/hr。配置好的输注液不应静脉推注或快速滴注。

单抗药物种类较多，小编无法一一赘述。想了解更多信息的读者，可登入FDA官网查询相关信息。以下是部分肿瘤相关单抗药物集锦。

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4、2016抗体市场数据出炉！（国内抗肿瘤单抗10大药物一览）
根据汤森路透最新数据，全球目前已获批及进入Ⅲ期临床研究的抗体类药物共有243个，其中121个品种已经获得美国FDA的批准，占创新生物抗体药物的74.23%，预计2016年全球抗体类药物市场已超过1000亿美元的规模。在抗体类药物专利期满后，生物仿制药已是近年来医药界的热点，呈现出群雄逐鹿的态势，从而带动了国内外医药市场再创新高。据CFDA数据显示，其批准的生物大分子药物“国药准字Ｓ”批文已有1653张，95%以上的品种已投入市场。具体到抗体类药物，从各大终端来看，城市等级医院单抗药物的销售规模占整个市场近90%，预计2020年中国单抗市场规模可达280亿元，行业复合增速达到30%。
生物大分子药市场超1000亿元据最新数据显示，2016年1～9月，国内重点城市公立医院生物大分子药物用药金额为72.71亿元，预计全年用药金额为100亿元，同比上一年增长了13.76%。专家预计2016年中国生物大分子药物制品总体市场已超过1000亿元规模，占据国内药品市场的9.16%。在生物大分子药物市场中，包括了抗肿瘤生物工程类、免疫抑制生物类、免疫刺激生物类、眼科生物工程制剂、纤溶酶类生物制剂、人凝血因子、神经生长因子、生物重组激素、生物胰岛素、生物疫苗和免疫球蛋白等11个亚类。
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国内抗体市场规模达50亿元数据显示，2016年国内重点城市公立医院使用的单克隆抗体药物有18个，用药金额为29.98亿元，同比上一年增长了13.56%，预计国内抗体用药将达50亿元市场规模，主要集中用于抗肿瘤、免疫类和眼科领域。TOP5品种依次是利妥昔单抗、曲妥珠单抗、贝伐珠单抗、雷珠单抗和重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白，TOP5品种用药金额约占据抗体市场的近四分之三。

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! l3 B- U; B3 o$ ?! }2 o9 s国内抗肿瘤单抗10大药物数据显示，2016年国内重点城市公立医院使用的抗肿瘤单克隆抗体药物市场超过20亿元，同比上一年增长率为15.98%。TOP10的品种是罗氏的利妥昔单抗、曲妥珠单抗和贝伐珠单抗、勃林格殷格翰公司的西妥昔单抗、百泰生物的尼妥珠单抗、先声的人血管内皮抑制素、上海三维的重组人5腺病毒、上海赛达生物药业的重组改构人肿瘤坏死因子、深圳赛百诺的重组人P53腺病毒、成都华神的碘(131I)美妥昔单抗。
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随着生物单抗专利到期，国内已进行了仿制生物制品的研究开发。据CFDA最新数据，国内有多家获得临床批文。利妥昔单抗2016年已由正大天晴药业集团获得临床批文，华兰基因工程的重组抗淋巴细胞瘤(CD20)单抗 (利妥昔单抗) 获得临床批文，海思科公司的生物药物“HSK-III-001注射液” 获得临床批文。销售位居市场第二的曲妥珠单抗2016年国内已有两家企业获得临床批文，分别是正大天晴药业集团的注射用曲妥珠单抗，华兰基因工程的重组抗人表皮生长因子受体2(HER2)单抗(曲妥珠单抗) 注射用药。销售位居市场第三的贝伐珠单抗国内2016年也有两家企业获得临床批文，分别是正大天晴药业集团的贝伐珠单抗注射液，上海恒瑞医药的贝伐珠单抗注射液。销售位居市场第四的西妥昔单抗则由佛山安普泽生物医药获得临床批文。
雷珠单抗-竞争AMD雷珠单抗是基因泰克开发的产品。2006年美国FDA批准雷珠单抗，用于治疗新生血管性老年黄斑变性，商品名Lucentis。瑞士诺华公司获得了美国以外市场的销售开发权；老年性黄斑变性是全世界工业发达国家中，导致老年患者失明的首要原因，属于第三大致盲性眼病。2011年12月获CFDA批准诺华的雷珠单抗注册，商品名为诺适得。数据显示，2012～2015年中国重点城市公立医院雷珠单抗市场表现出逐年增长态势，2015年公立医院诺适得的销售额为2.54亿元，同比上一年增长了20.99%。随着成都康弘的康柏西普上市，在激烈竞争下雷珠单抗销售缓慢下滑，预计2016年国内重点城市公立医院雷珠单抗市场为2.46亿元，同比上一年下降了3.27%，是TOP抗体药物中居第四位的品种。

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随着国内外眼科技术市场的接轨，成都康弘的康柏西普的上市，我国眼科技术有了快速发展，眼病的诊断和治疗水平的长足迈进。客观上也导致了我国老年人黄斑变性的发现率呈现出增长态势。据统计数据显示，中国每年约有30万新发的年龄相关性黄斑变性患者。随着全球老龄化社会的全面到来，以及电子视屏及手机LED屏幕蓝光对眼睛的直接影响，对眼睛黄斑区造成和加速了不同程度的伤害，预测眼科用抗体药物仍是极具潜力的市场。重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白属于依那西普生物类似药，是国内开发的仿制生物制品。2005年上海中信国健药业最先获得注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白批准，商品名为益赛普；随后上海赛金生物医药获得批准，商品名为强克；2015年浙江海正药业获得批准。注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白在国内重点城市公立医院TOP5抗体类药物中位居第五。皮下注射适用于中度及重度活动性类风湿关节炎、成人中度至重度斑块状银屑病、活动性强直性脊柱炎。数据显示，2012～2015年中国重点城市公立医院注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白销售额为1.62亿元，全年城市公立医院注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白可达到2.15亿元，同比上一年增长7.61%。上海中信国健药业的益赛普占93.90%市场份额，上海赛金生物医药的强克占据5.92%市场份额，浙江海正药业占据0.17%市场份额。

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抗体研发管线扩展2016年，美国FDA批准了22个新药，其中新生物制品占据七席，占据了31.82%比重。分别是美国Elusys Therapeutics公司的抗吸入性炭疽感染的Anthim；美国礼来公司的抗中重度银屑病药物Taltz；以色列梯瓦公司的血液嗜酸性粒细胞水平升高重度哮喘成人患者用药Cinqair；瑞士罗氏公司的抗膀胱癌治疗药物Tecentriq，瑞士罗氏和Biogen的复发缓解型多发性硬化症药物Zinbryta；美国礼来的抗软组织肉瘤药物Lartruvo；美国默沙东的降低梭菌毒素B感染风险药物Zinplava。

5、单抗药物学习视频资料
单抗药物药学研究一般申报要求-浙江海正药业李镭
http://v.youku.com/v_show/id_XNjY2NzY2NDky.html
如何建立稳定可靠的层析方法去除多聚体-上海嘉和生物
http://v.youku.com/v_show/id_XNjY2Nzc5NTgw.html?spm=a2h0j.8191423.module_basic_relation.5~5!2~5~5!3~5!2~1~3~A&from=y1.2-1-176.3.1-2.1-1-1-0-0
单抗捕获步骤中蛋白A亲和层析填料的选择与优化
http://v.youku.com/v_show/id_XNjY2NzQ1NjQ0.html?spm=a2h0j.8191423.module_basic_relation.5~5!2~5~5!9~5!2~1~3~A&from=y1.2-1-176.3.7-2.1-1-1-6-0

推荐一个不错的视频

生物制品GMP检查中常见问题分析-国家局药品认证中心特聘专家

http://v.youku.com/v_show/id_XNjY2NzkwNjk2.html?spm=a2h0j.8191423.module_basic_relation.5~5!2~5~5!5~5!2~1~3~A&from=y1.2-1-176.3.3-2.1-1-1-2-0

6、学习资料汇总
单抗药物研究进展;
FDA在审批上市新抗体药物及生物类似药方面的进展_陈玉琴;
FDA批准的单克隆抗体一览表(1986-2014.8);
FDA批准单克隆抗体信息一览表(至2016年6月);
重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的质控方法及质量标准的建立;
治疗性单克隆抗体类制品质量控制标准的思考;
人用单克隆抗体质量控制技术指导原则;
关于进口单克隆抗体类生物治疗产品注册检验资料规范性的思考;
单抗类生物制品非临床安全性研究和评价的考虑要点;
+ `/ ]* q. G' |; v* O2 }; K, s' r' `单克隆抗体的制备及应用;

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7、EMA单克隆抗体质量指南总结

EMA于2016年9月正式生效一份有关单克隆抗体（及相关产品）在研发、生产、特性确证和质量标准方面的指南(Guideline on development, production, characterisation and specification for monoclonal antibodies and related products,EMA/CHMP/BWP/532517/2008)。这份指南提供了全面的单克隆产品在质量方面的建议，适用来源于单克隆细胞系产品的上市申请阶段（不包括体外诊断产品），但某些原则也适用于临床试验阶段的产品质量问题。同时，它替代之前三个指南，分别是：“Production and quality control of monoclonal antibodies (3AB4A)”, “Radio pharmaceuticals based on monoclonal antibodies (3AQ21A)”, “Guideline on development, production,characterisation and specification for monoclonal antibodies and related products, EMEA/CHMP/BWP/157653/2007”。

小编对整个指南的内容进行了梳理和概括，以便相关从业人员快速了解指南要求。

议题	要点
研发	1. 抗体结构：从机制、生物活性和稳定性方面讨论抗体结构，如产品的免疫化学特征、效应功能及诱导抗体反应。 2. 细胞系：讨论细胞系的选择理由。如果是用重组DNA技术，须符合3AB1A，ICHQ5A，Q5B和Q5D的要求。慎重考虑通过细胞融合或转化获得的永生化人/非人B淋巴细胞作为单克隆细胞系。以人B淋巴细胞作为母细胞系也会带来传染性病原体的传播隐患。杂交瘤细胞系也是一种选择，其来源和母细胞特征需要详细的记录。 3. 研发过程：分离单克隆细胞系前的过程，如细胞融合、病毒转化等，无需详细描述。但关乎产品安全性和有效性的一些信息，如翻译后修饰，外源试剂和潜在污染物的使用等，需要充分提供以评价单克隆细胞系的鉴定和纯度。
生产	1. 工艺：恰当描述和验证。工艺验证至少要达到i）证明工艺有能力生产出质量一致的产品，ii）评价工艺去除杂质和病毒的能力，iii）证明每个操作单元的操作性，如纯化、无菌灌装等。 2. 中控：建立中控方法（包括产品质量属性和工艺参数），以及原液和成品质量标准，以分析产品相关杂质（如分子错配，脱酰胺，氧化，聚集等），工艺相关杂质（如HCP，DNA，蛋白A，血清和培养基成分等），以及工艺相关参数（如载量，pH，温度等）。纯化过程中如用到蛋白A亲和填料，须记录蛋白A来源和制备方法。如果蛋白A制备过程用到了IgG，须考虑IgG的质量，尤其在病毒安全性方面。 3. 平台化生产：如用平台生产的方法，需要在上市申请时进行充分的工艺验证。验证数据需要来自拟用于生产商业批的最终工艺和生产地点生产出的样品。其他来源的数据也可作为支持性数据。同时需要考察控制策略的适用性。批准后，若发生工艺变更，则需要评估变更对产品质量的影响。进一步，变更的理由需要讨论。 4. 病毒安全性和TSE：遵循ICH Q5A指导原则，工艺的病毒灭活/去除能力应该需要验证。平台化的生产数据积累可帮助减少验证研究的次数，但需要充分的证据去说明工艺的相似性。如果有来源于牛或其他TSE相关动物的生产原料，需要参考指南”Minimising the risk of transmitting animal spongiform encephalopathy agents via human and veterinary medicinal products”。
质量属性	产品需要进行全面的质量属性确证，并且在提交申请时，内部参比品的质量属性应该也已建立。 1. 物理化学：抗体类别、亚类、轻链组成、一级结构、N端和C端变异性、自由巯基、二硫键（包括完整性，错配）、碳水化合物含量及其结构、糖谱、糖基化位点、是否存在重链其他位点的糖基化、糖型结构（特别是甘露糖糖基化、半乳糖基化、岩藻糖基化、唾液酸化）、以及主要的糖型比例（G0/G1/G2）、高级结构 2.免疫学：结合实验（亲和力，免疫反应性），非目标反应性、细胞毒性、人组织交叉反应性（按照免疫组织学的程序）；如有必要，可参考非临床和临床数据；互补决定区域、抗原决定部位、补体的结合力和活性、其他效应区域（即使该功能不是目标生物活性） 3. 生物活性：用体内或体外的方法评价产品的生物活性。讨论与安全性和有效性相关的效应功能和作用机制，详细分析ADCC，细胞毒素（如细胞凋亡），补体结合能力和活性以及其他效应功能（包括Fc gamma受体结合活性，FcRn结合活性） 4.纯度、杂质和污染：纯度/杂质应采用正交的方法进行分析，比如分子量、异构体、消光系数、电泳、色谱和光谱等测定。此外，使用合适的方法定量/定性分析电荷变体，联合使用一些方法测定聚合物、不溶性微粒、和可见异物（不仅需要使用药典方法测定，其他原理正交的方法也需要去测定）。工艺相关杂质包括HCP，DNA，细胞培养和纯化残留物等。污染物包括微限，内毒素，肽聚糖等。 5. 定量：如果存在量-生物活性关系，可以通过测定抗体量而不测生物活性用于成品的标示量和生产过程中（如灌装）。
质量标准	遵照ICHQ6B。用来自于非临床/临床批次、工艺验证批次、稳定性批次和其他相关研发数据建立认可标准。 1. 鉴别：方法要有专属性，可区分在同一生产车间生产的其他抗体。也许需要不止一个方法来鉴别抗体。 2. 纯度和杂质：同质量属性。强调方法的正交性，适用性以及可接受标准。特别是糖基化的测定及其可接受标准，糖基化与产品的PK或免疫原性相关，其标准应通过与活性以及临床效果的相关性来综合判断。 3. 活性：活性分析应能体现出与产品临床效果的相关性。对于中和类抗体，测定抗原结合活性可以接受；若抗体效应功能重要的话，除了上述结合活性以外，基于细胞的效应功能分析也是必须的。需要注意的是，上述两种测定结果不可互换。比活性（单位质量的生物活性）对于证明生产工艺的一致性很有价值。 4. 定量：一般用蛋白质的含量表示 5. 其他：如外观、溶解度、pH、渗透压、装量、无菌、细菌内毒素、稳定剂含量、水分、可见异物和不溶性微粒（要符合欧洲药典要求）