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一、含量方法学研究所需图谱(流动相、检测限和定量限参照有关物质,如有关物质和含量方法一致,可以只做进样精密度、溶液稳定性)
% |7 B: a. f! X2 E1 P: t1、线性:包含60%、80%、100%、120%、140%,通常是5~7针,要求r.0.999。
0 i/ I3 k3 D2 ?7 a) g2、进样精密度:用对照品做,单样连续进六针,要求RSD<2.0%。
" w4 T3 [9 k; \- K5 y$ F5 f3、重复性试验:双样双针,一个样进两针,六个样,两个对照,总共16针,要求RSD<2.0%。4 M0 ]( u# ]- s) s. m7 k) W
4、回收率(准确度):总共22针,分别做三个80%、三个100%、三个120%,一个样两针,两个对照四针,九个样18针,要求回收含量在98%~102%之间,RSD<2.0%。+ F: z' S9 j' J3 T
5、含量测定:总共28针,方法验证—两个对照品四针,仿制品两个样四针,小试样品两个样四针。中试样品三批—两个对照四针,一批双样四针,三批六个样十二针。! F+ |4 b: u4 ^ n# A
6、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。3 _( M3 R, K/ [; ]3 b
7、专属性:空白辅料、空白溶剂、正常样、热破坏样、酸破坏样、酸液空白样、碱破坏样、碱液空白、光破坏样、氧化破坏样、双氧水空白样。共九针,需达到降解约20%,该杂质峰与其它峰应能完全分离,分离度不得小于2.0(已知杂质)。- ~% O- x3 _$ d, f/ R
8、稳定性试验:包括加速0、1、2、3、6月30、40℃,长期3、6、9、12、24月,均做含量测定和有关物质。含量测定双样双针,一样两针,一批两样,三批六样十二针,两个对照四针。有关物质做空白3 ?; q7 x4 F! d4 V; F5 w8 Y
溶剂,单样单针,100%样品、1%自身对照,共七针。
2 p+ H) T2 w- H/ ?二、有关物质方法学研究所需图谱9 K/ _! L) F/ @. d) K! ^
1、波长扫描和流动相的选择:参照国家标准并根据欧洲药典、USP英国药典以及日本药典中收载的流动相做,取样品,配成一定浓度进样,进行比较确定,选取其中最合适的。确定流动相后,并驱样品、对照品以及国外上市样品,配成参考文献中的浓度,进样;6 s4 P, F7 j4 B) g# ]" u8 k
要求:分离度达1.5以上,分析时间通常为主身份保留时间的2-3倍,分析时间长可考虑采用梯度洗脱,共 n+3张图谱6 [& ~$ l' j \, R! {7 ]- O% l2 f! w
系统适用性试验:配制6份相同浓度的杂质溶液进行分析,该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%,保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外,杂质峰的拖尾因子不得大于2.0,理论塔板数应符合质量标准的规定。(已知杂质)- [* X- M. |' B: G8 ?6 U% \
耐用性:分别考察流动相比例变化±5%、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、检测波长变化±5nm、流速相对值变化±20%以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时,仪器色谱行为的变化,每个条件下各测试两次。可接受的标准为:各杂质峰的拖尾因子不得大于2.0,杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离;各条件下的杂质含量数据(n=6)的相对标准差应不大于2.0%,杂质含量的绝对值在±0.1%以内。" b' E7 U% _$ A/ \3 U2 O) F' v$ c
2、空白溶剂以及辅料干扰试验:取溶解样品用的溶剂,注入液相色谱仪,记录色谱图。观察溶剂图谱情况。并取样品、处方量的空白辅料按同样方法配成一定的浓度,进样,记录的谱图。看辅料是否有干
7 n( T, z4 H/ ^% {扰。共三张图谱,辅料吸收峰面积相对于主峰<0.05%视为无干扰。 杂质定位:如有已知杂质并且杂质对照品可获得的,配制杂质对照溶液,进样,记录色谱图。共四张图谱。4 d$ K3 h! h/ _
3、专属性:正常样、热破坏样、酸破坏样、酸液空白样、碱破坏样、碱液空白、光破坏样、氧化破坏样、双氧水空白样。共九针,需达到降解约20%,该杂质峰与其它峰应能完全分离,分离度不得小于2.0(已知杂质)。+ @0 B3 F* F& c, r
4、检测限与定量限:检测限用稀释法—12个样12针。配制6份最低定量限浓度的溶液,所测6份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%,峰面积的相对标准差应不大于5.0%。检测限S/N>3,定量限S/N>10。, I& f; _ \' M5 e% z1 H+ R6 t
5、回收率(已知杂质):分别做三个80%、三个100%、三个120%,一个样两针,两个对照四针,九个样18针,要求回收含量在80%~120%之间,RSD<2.0%。各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间,如杂质的浓度为定量限,则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%,相对标准差应不大于10%。
# m4 U4 w- r1 x0 s; o6、线性:包含60%、80%、100%、120%、140%,通常是5~7针,要求r>0.999。截距在100%响应值的25%以内,响应因子的相对标准差应不大于10%。% O, s, q$ W& O
7、1%精密度:单样连续进六针,要求RSD<2.0%。
7 w. X w$ k6 w% d) q0 k8、重复性试验(已知杂质):双样双针,一个样进两针,六个样,两个对照,总共16针,要求RSD<15.0%。! S" O9 i+ g6 T2 P
9、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。按照分析方法分别配置对照品溶液与供试品溶液,平行测定两次主成分与杂质的含量,然后将上述溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室(4℃)中,在1、2、3、5和7天时分别平行测定两次主成分与杂质的含量。可接受的标准为:主成分的含量变化的绝对值应不大于2.0%,杂质含量的绝对值在±0.1%以内,并不得出现新的大于报告限度的杂质。. v3 {9 r1 n; l, o
10、小试方法验证及被仿制品:被仿制品1%自身对照,被仿制品100%样品,小试100%,小试1%自身对照。方法验证:中试样品三批,100%样品和1%自身对照,空白溶剂。
7 T' @/ n+ t' Z11、注明:主峰图谱要求——拖尾因子0.95≤r≤1.05,分离度最好要求1.5,理论板数一般不低于3000.(个别品种需根据实际要求而定)。
- x/ j% u Q1 ~% _5 f三、聚合物方法学研究图谱' i) G! Z2 u/ e2 X6 N- a- e
1系统适应性试验(水和磷酸盐缓冲液):蓝色葡聚糖2000和对照品,理论塔板数要求不低于700。6 W5 H- O4 z: i( B! {' k0 `
2、空白辅料
# \ }( M. q( Z* _# l, m7 u3、供试品
+ X9 \8 C0 `* i, ]4 ]' d) Z4、专属性试验:供试品,辅料干扰。
3 P& J5 w( T+ o1 ^; d+ c: k5、检测限与定量限:般以信噪比3:1相应浓度确定最低检测限,以检测限×1000的量或浓度作为测定量(浓度)
0 L% M! t; S6 l, |. X2 s$ h6、1%进样精密度:单样连续进六针,要求RSD<2.0%。
( C6 v1 A+ C8 W+ p$ @7、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。1 Z, P$ @5 k$ r ~& A
8、线性:(浓度范围20%-200%)7个样。
( l; _- r5 o+ n' K2 N供试品溶液的浓度与聚合物测定结果的相关性考察:制备系列的供试品溶液,浓度范围为规定浓度的50%~200%,共三份样品,以测得的高聚物峰面积对溶液浓度进行线性回归,相关系数r应大于0.99。 F值测定的重现性考察:F值为对照溶液的浓度(mg)与测得的峰面积的比值,要求日内、日间的相对标准偏差在5%以内。
* V$ Z! b+ f2 w0 V对照品* D. |# J$ c$ ]! u
20%
2 d. F4 i6 O- A, j4 h1 C0 q! t* |50%
" g( }7 G. |1 f! d# v' D: F80%
" K6 S3 U; O+ _% V- ?+ x100%3 T" B- ], P' i1 I0 K' `9 Y6 f
120%1 Q% Z1 m9 K* }* {: {$ z
150%
' [$ [4 B! ]! e9 Q' f) H$ E200%- ]' h u0 P; V
9、聚合物测定(方法验证)
9 [, |+ I" v' D' l四、影响因素五天和十天:分别作含量测定和有关物质
% u5 H/ K/ h9 m7 q, D& H1 u含量测定双样双针,一样两针,高温,高湿,强光、对照品。 有关物质单样单针,100%样品、1%自身对照,空白溶剂。
6 ^4 d) Y$ ]- b$ B
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