【夯实基础】液相色谱定量分析原理

9 n( x/ k' n- L% N6 R5 P【夯实基础】液相色谱定量分析原理
2015-05-21 仪器信息网
液相色谱定量分析原理
& c- O( Q% r. c& e& d5 |2 B! c在定性的基础上定量,需有纯物质作为标准物液相色谱定量是相对定量的方法:即由已知量的纯标样推算混合物中被测物的量定量的依据是:
9 v* R& g; M6 C; Y& i

• 被测组分的量与响应值(峰高或峰面积)成正比
  
  

• 由已知量的标样可求得定量校正因子
  
  + B6 \6 A) ]2 m5 A3 n

• 定量校正因子:是定量计算公式中的比例常数,其物理意义是单位响应值(峰面积)所代表的被测组分的量
  
  $ k; O+ ~& ~# I

• 测定未知组分的响应值,通过定量校正因子即可求得其含量
  
  7 d6 z( X1 W+ f1 ]. v

液相色谱定量分析的步骤

1、选择一个适合定量分析的色谱方法：

• 确认被检测组分峰,并达到分离度(R)大于1.5
• 确定被测组分色谱峰的一致性(纯度)
  
  
  

• 确定方法的检测限及定量限;灵敏度及线性范围
  
  
  

2、用不同浓度的标准样品建立校正曲线
  n1 l/ Z7 |9 u2 Z9 X& o3、考查定量方法的准确度及精密度
4、用相应的色谱管理软件实施样品采集,数据处理及报告结果
鉴别需定量的色谱峰(定性)
. w0 r7 P7 l4 O: I% h% b定性鉴别每个要定量的色谱峰
首先用标样确定欲定量之色谱峰的保留时间(Rt)，通过比较保留时间,找到未知样中各色谱峰所对应的组份，色谱定性是用与标样比较保留时间的方法，判据并不充分进一步的确认(定性)1、标准加入法
2、同时用其它方法：其它色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱) 、其它检测器 （PDA：光谱图比较、谱库检索；MS：质谱图解析、谱库检索）3、其它仪器方法
0 V! n7 ~" O8 K确认定量峰的一致性
$ h, I- F1 ?+ j$ b4 w5 \7 f确认色谱峰的一致性(纯度)
# e3 k& l+ Y5 c
8 I3 b% s  j6 y1 p: ~/ g

• 保证每个色谱峰下只有一个被测的组份
  5 r  Q' x  q" k- l2 M/ N; s2 K8 c$ i& @
  
  

• 检查是否有共流出的物质（杂质）干扰
  
  
  

色谱峰一致性(纯度)确认的方法

• 用光电二极管矩阵(PDA)检测器比较光谱图
  
  
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• 峰纯度鉴定
  
  
  

• 2996的纯度角理论
  
  ) A6 E3 l# q8 ^4 E

常用的定量方法
标准曲线法,分为外标法和内标法:
) Y) S# I- ]/ m. V* p* j% {5 w: H
8 W/ y/ [1 c3 V( k( R

外标法：在液相色谱中用得最多

内标法：准确，但是麻烦，在标准方法中用得最多

影响定量分析结果的因素

准确度不好可能由下述原因造成:

–峰面积积分不正确、样品分解或制样时导入杂质、样品瓶不密封,样品或溶剂挥发、制样不正确、进样问题、内标制备不正确

0 P7 [% S+ l& k, g) E. ?

精密度不好可能的原因:

峰积分不正确、进样或进样器有问题、样品分解或制样时引入了杂质、色谱问题、检测器响应下降

文章来源：百度文库

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