EDQM65 2613常见问答中文版

EDQM questions and answers

章节《2.6.13非无菌产品微生物检测：特定微生物检测。B.统一的方法》常见问答

相关段落	问题	回答
3.1测试菌株的制备	我能不能使用其他的非Ph.Eur.引用的菌株？	你必须使用该章节引用到的微生物或从其他的菌种收藏机构获得的相当的菌株。
3.2阴性对照	何时实际必须作阴性对照：检测方法适用性时？检测产品时？还是两种情况都需要？	你应在当你检测产品的时候同时作阴性对照。
	阴性对照的目的是什么？	这个阴性对照的目的是为显示产品的检测过程中没有被污染。 如果一个阴性对照得到了一个阳性结果，这个检测是无效的并且可能需要重做。
	是不是在每次检测产品时或在方法验证时或可能在一个定期的时间间隔都必须做阴性对照？	最好在每次检测产品时作一个阴性对照。
3.3培养基的生长促进性及抑制性	是否有必要检测所有收到批次的培养基的生长促进性或仅作为微生物学的验证？	必须检测每批新的培养基的生长促进性（不管是供应商还是分析者都必须）。
	为对新的批次进行比较，我们是否必须系统的平行检测以前批次和被认可批次？	你不是必须平行检测与以前批次。如果生长有清晰的描述你可以与“纸上”相比较。
	在我们比较新鲜批次与预先批次的生长促进性时，规定标准是什么？是否我们需要考虑2倍的偏差。	可以使用2.6.12中描述的2倍。在这章中没有故意给出严格的指示，因为这是定性检测而不是定量检测。你可以定义你自己的对比标准，例如在规定的最短培养时间内的菌落大小。
	你不得培养超过《规定的最短的培养时间》。给出的时间（例如，18-24h）如何确切的遵照？	对于培养基的生长促进性，必须培养不超过18h（最坏的情况）。 对于培养基的抑制性，必须培养不少于24h(最坏的情况)。 对于培养基的指示性，可以在规定的范围内培养（此处为18h-24h）。
	在氯化镁孔雀绿沙门氏菌增菌肉汤的生长促进性检测中，在培养时间后没有可见的生长，但在选择性的琼脂上次代培养后有典型的生长。这种情况仅在我们实验室出现吗？为对比新的批次，我们是否必须系统的平行检测以前批次和被认可批次？	对于氯化镁孔雀绿沙门氏菌增菌肉汤，当我们培养少量（通常10 mL的氯化镁孔雀绿沙门氏菌增菌肉汤中接种物为20CFU）的沙门氏菌时，这是能被观察到的。 尽管增菌肉汤看起来是清澈地，你必须通过将氯化镁孔雀绿沙门氏菌增菌肉汤在固体琼脂上次代培养来确认沙门氏菌的回收率。
3.4检测方法的适用性	此处的含义是否是：对于每种菌株，必须进行单个的适用性检测，或可能可以使用混合有4种菌株的接种物？	规定的方法是：菌株应分别接种。不允许用混合的接种物。
	必须使用数量相当于不超过100CFU测试菌株单独地接种，你是否可以澄清其含义是否是：仅将检测方法中检出的规定的微生物接种至生长培养基中，还是对于每种规定的检测方法，4种微生物中的每种都需要单独地加入至生长培养基中？	仅将检出的规定的微生物接种。
	应该使用哪个检测用微生物？仅用与用于各培养基生长促进性检测相同的微生物，还是也可使用用于培养基的抑制性检测的微生物？	你不必使用一个抑制菌株来检测方法的适用性。例如，在你检测方法对E.Coli的适用性时，仅需要使用E.coli作为用于生长促进性检测的微生物。
4.1胆汁耐受革兰氏阴性菌	什么是“胆汁耐受革兰氏阴性菌”？	这类微生物这里没有严格的定义。此处可操作性的定义为哪些在规定的条件下在结晶紫中性红胆汁葡萄糖琼脂培养基上显示生长的微生物。它们包括假单胞菌诸如Burkholderia cepacia。在胆盐存在下生长的不能使乳糖发酵但可利用葡萄糖，能在琼脂上生长的革兰氏阴性菌，例如，一些Pseudomonas,Aeromonas 和Yersinia Species。
4.2 大肠杆菌	在4-2-2选择和次代培养中，提高温度至42-44º的目的是什么？ 只要能证明E.COli的回收率在限定条件内，是否可以采用一个替代性的温度范围，例如。35-37º	提高温度至42-44º的目的是考虑到了E.COli选择性的条件。选定的温度通常是在敏感性和专一性之间的一个折中条件，在这样一个较高的温度下，不是所有的E.COli都能生长，或生长的同时并产气。一个替代性的温度范围可能偏离欧洲药典的方法，但你总是可以按照欧洲药典（章节1.2）通则中的描述替代的方法。
4.1.3-2解释	在章节5.1.4，表5.1.4-1中，非无菌制剂微生物质量验证标准中对胆汁耐受革兰氏阴性菌的规定以CFU形式给出。在章节2.613中4.产品检测项目下，规定了用于胆汁耐受革兰氏阴性菌测定的细菌的最可能数。这里有一个偏差，因为CFU是活菌数量的一个量度，然而测定的细菌的数量将包括所有的死的细胞，和活的细胞。你是否可以建议将合适的单位用于胆汁耐受菌的检测？最可能数细菌/mL或CFU/mL或这些单位是可互换的？	这里是有一些不一致，因为“细菌”每克本身就是不正确的，因为这些是实在的菌落。然而在该文中这些词可被认为可以互换。
4.2.3解释	如果在最初的肉汤中加入了10g的样品，（例如用于E.Coli（4.2）的检测），但只将一定量的产品次代培养至第二个肉汤中，这个肉汤仅代表1g的实际产品，且对它进行了培养。在检测结束时，对于得到到的阴性结果，是否应归纳为“每10g中没有检出”，还是“每g中没有检出”？	预培养的数量是1g，则检测结果为“在1g中没有检出”。对于沙门氏菌，你将注意到它采用了“在10g中没有检出”。
4.5.3解释	在金黄色葡萄球菌的选择性的培养基上可观察到，链状的革兰氏阳性球菌的黄色菌落，但在检测样品中黄色的菌落没有清晰地区域。然而，阳性培养物显示为被黄色区域包围的簇状的革兰氏阳性球菌的黄色菌落。	你们的产品可能被污染了，可能不是被欧洲药典中描述的品种，而是被另一种微生物污染了。GLP（优良实验室规范）应使你考虑到你应该做出调查。（例如，鉴别种别并找出其来源）。可能这个产品不能被放行，但这应该由QC实验管理者来决定。
4.6梭菌属	何种药物制剂或原料药规定了梭菌属的搜查？	对于粉末化的动物器官，有粪便污染的风险的产品可能有梭菌属污染并增殖，天然来源的原料，可能被土地污染。然而，至今还没有在任何各论中引用。这项检测与哪些在无氧或低氧条件下使用的制剂特别相关。

5.推荐的溶液和培养基	替代性的培养基是否是可接受的？	使用替代培养基的方法可被认为是替代性的方法，只要能证明它与欧洲药典的方法相当，则可能可以使用。
	我们如何进行培养基的pH的测量？写的是在25℃下测量pH值。但在这个温度下，琼脂是固体。因此，我们该如何调整pH?	你可能可以使用一个结实电极。这些电极可用于测量半固体样品诸如肉，奶酪和水果。这些电极肯定适用于测量固化的琼脂。必须在培养基的制备过程中调整pH值，以确保最终的培养基符合pH的标准。
	用统一的方法中推荐的甘露醇盐琼脂培养基时，如果我们的金黄色葡萄球菌的生长有问题，且大肠杆菌的抑制有问题，其原因是什么？	甘露醇盐琼脂的组分已经是最宜用于金黄色葡萄球菌的复苏和大肠杆菌的抑制的（pH,营养性，...）。你应该验证培养的温度是否正确。并且，培养基的稳定性可能有问题，因此你需要验证培养基是否是在足够适当的条件下储藏的。 最后你可尝试使用不同供应商的培养基，可能可以给出更好的结果。

来源：网络

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