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一、含量方法学研究所需图谱(流动相、检测限和定量限参照有关物质,如有关物质和含量方法一致,可以只做进样精密度、溶液稳定性)
6 t6 S0 n/ Y0 ~4 f+ @ s5 ?% d( s1、线性:包含60%、80%、100%、120%、140%,通常是5~7针,要求r.0.999。
; T$ I4 B4 y" m4 X' V' y& _2、进样精密度:用对照品做,单样连续进六针,要求RSD<2.0%。
" _: J1 t1 D6 ~0 ~3、重复性试验:双样双针,一个样进两针,六个样,两个对照,总共16针,要求RSD<2.0%。
8 v; {% t# \$ Y- P* M D1 u5 E, `; j& o4、回收率(准确度):总共22针,分别做三个80%、三个100%、三个120%,一个样两针,两个对照四针,九个样18针,要求回收含量在98%~102%之间,RSD<2.0%。
$ j/ I2 s# |6 m, x& l5 Y6 Z$ K5、含量测定:总共28针,方法验证—两个对照品四针,仿制品两个样四针,小试样品两个样四针。中试样品三批—两个对照四针,一批双样四针,三批六个样十二针。; e8 ~7 @9 ?% |
6、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。* s6 S0 G2 P2 n6 r5 m; M
7、专属性:空白辅料、空白溶剂、正常样、热破坏样、酸破坏样、酸液空白样、碱破坏样、碱液空白、光破坏样、氧化破坏样、双氧水空白样。共九针,需达到降解约20%,该杂质峰与其它峰应能完全分离,分离度不得小于2.0(已知杂质)。, S& k7 r; O+ \3 H6 W' e" i
8、稳定性试验:包括加速0、1、2、3、6月30、40℃,长期3、6、9、12、24月,均做含量测定和有关物质。含量测定双样双针,一样两针,一批两样,三批六样十二针,两个对照四针。有关物质做空白7 e9 v( f; C" v8 ?' P
溶剂,单样单针,100%样品、1%自身对照,共七针。" o" k/ Z. N2 z% J. f, i, ?
二、有关物质方法学研究所需图谱7 a' P8 `1 Y8 D" J( c
1、波长扫描和流动相的选择:参照国家标准并根据欧洲药典、USP英国药典以及日本药典中收载的流动相做,取样品,配成一定浓度进样,进行比较确定,选取其中最合适的。确定流动相后,并驱样品、对照品以及国外上市样品,配成参考文献中的浓度,进样;
- ]2 y& @( d. t要求:分离度达1.5以上,分析时间通常为主身份保留时间的2-3倍,分析时间长可考虑采用梯度洗脱,共 n+3张图谱
/ h7 ^; y. y$ ?' j, q" K7 F4 I/ w系统适用性试验:配制6份相同浓度的杂质溶液进行分析,该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%,保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外,杂质峰的拖尾因子不得大于2.0,理论塔板数应符合质量标准的规定。(已知杂质)
3 ]/ p& C: `3 X/ W2 n耐用性:分别考察流动相比例变化±5%、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、检测波长变化±5nm、流速相对值变化±20%以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时,仪器色谱行为的变化,每个条件下各测试两次。可接受的标准为:各杂质峰的拖尾因子不得大于2.0,杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离;各条件下的杂质含量数据(n=6)的相对标准差应不大于2.0%,杂质含量的绝对值在±0.1%以内。
. Q9 M7 q; O5 l, ?5 |2、空白溶剂以及辅料干扰试验:取溶解样品用的溶剂,注入液相色谱仪,记录色谱图。观察溶剂图谱情况。并取样品、处方量的空白辅料按同样方法配成一定的浓度,进样,记录的谱图。看辅料是否有干3 n/ Q2 u! h; y9 R5 `6 W5 ?- D
扰。共三张图谱,辅料吸收峰面积相对于主峰<0.05%视为无干扰。 杂质定位:如有已知杂质并且杂质对照品可获得的,配制杂质对照溶液,进样,记录色谱图。共四张图谱。7 n) r5 f: c3 [& `4 b3 d2 P
3、专属性:正常样、热破坏样、酸破坏样、酸液空白样、碱破坏样、碱液空白、光破坏样、氧化破坏样、双氧水空白样。共九针,需达到降解约20%,该杂质峰与其它峰应能完全分离,分离度不得小于2.0(已知杂质)。+ ^+ U; E- y/ A" k9 ^+ A
4、检测限与定量限:检测限用稀释法—12个样12针。配制6份最低定量限浓度的溶液,所测6份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%,峰面积的相对标准差应不大于5.0%。检测限S/N>3,定量限S/N>10。9 T/ Z$ ~/ u# h% L- R
5、回收率(已知杂质):分别做三个80%、三个100%、三个120%,一个样两针,两个对照四针,九个样18针,要求回收含量在80%~120%之间,RSD<2.0%。各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间,如杂质的浓度为定量限,则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%,相对标准差应不大于10%。: z9 g% d9 |7 L, E) C( f6 y7 V6 [5 h
6、线性:包含60%、80%、100%、120%、140%,通常是5~7针,要求r>0.999。截距在100%响应值的25%以内,响应因子的相对标准差应不大于10%。% ~* x5 P9 @" M) |& l; }
7、1%精密度:单样连续进六针,要求RSD<2.0%。8 U7 O2 G$ E2 {: n
8、重复性试验(已知杂质):双样双针,一个样进两针,六个样,两个对照,总共16针,要求RSD<15.0%。7 N t8 ^/ {% `9 e2 b; J' R
9、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。按照分析方法分别配置对照品溶液与供试品溶液,平行测定两次主成分与杂质的含量,然后将上述溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室(4℃)中,在1、2、3、5和7天时分别平行测定两次主成分与杂质的含量。可接受的标准为:主成分的含量变化的绝对值应不大于2.0%,杂质含量的绝对值在±0.1%以内,并不得出现新的大于报告限度的杂质。
D4 R1 m) f, }, @6 P4 n10、小试方法验证及被仿制品:被仿制品1%自身对照,被仿制品100%样品,小试100%,小试1%自身对照。方法验证:中试样品三批,100%样品和1%自身对照,空白溶剂。
- b0 A; z" Y$ @. Y! }( M! c8 Z' d7 N11、注明:主峰图谱要求——拖尾因子0.95≤r≤1.05,分离度最好要求1.5,理论板数一般不低于3000.(个别品种需根据实际要求而定)。
: [* H5 o9 ]% d: _# V三、聚合物方法学研究图谱' C! Q5 P2 u# v
1系统适应性试验(水和磷酸盐缓冲液):蓝色葡聚糖2000和对照品,理论塔板数要求不低于700。
0 D0 S+ T' b5 F9 s- b7 C4 ?, m+ }% A2、空白辅料
" T% v9 B$ k1 }; d3、供试品; |% B7 G. `0 ]
4、专属性试验:供试品,辅料干扰。
( l8 h2 V* \' ^2 o1 p* Y5、检测限与定量限:般以信噪比3:1相应浓度确定最低检测限,以检测限×1000的量或浓度作为测定量(浓度)
- B: |2 ~$ z+ o n6、1%进样精密度:单样连续进六针,要求RSD<2.0%。
$ K$ y! m- _% X( s7、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。
( ?& V. X: p% }' T0 h( r8、线性:(浓度范围20%-200%)7个样。
- o) G' U' Q @2 @6 z0 w \供试品溶液的浓度与聚合物测定结果的相关性考察:制备系列的供试品溶液,浓度范围为规定浓度的50%~200%,共三份样品,以测得的高聚物峰面积对溶液浓度进行线性回归,相关系数r应大于0.99。 F值测定的重现性考察:F值为对照溶液的浓度(mg)与测得的峰面积的比值,要求日内、日间的相对标准偏差在5%以内。+ u! t/ E! G/ P- d
对照品
) m- O% N; @5 l3 d2 T; F20%' T& t6 e: F& c; Y8 [: ]
50%
" Q) x# T+ G" K. J7 W1 ?80%
; i( s% A1 A& x2 G100%
# G& q0 W" m7 U p7 I120%+ r2 I& ^- L6 B- g0 t# }1 ^
150%' H3 q7 q# J6 O( R) d1 q. o, p4 U
200%. H- F. E! B$ T; c- V+ T
9、聚合物测定(方法验证)
& |) ^0 @ E! o+ q/ ~; f四、影响因素五天和十天:分别作含量测定和有关物质 d) D& x/ v9 M
含量测定双样双针,一样两针,高温,高湿,强光、对照品。 有关物质单样单针,100%样品、1%自身对照,空白溶剂。. R% U0 [! W, N; U2 _- E! c
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