【夯实基础】液相色谱定量分析原理

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2015-05-21 仪器信息网
; R- B. O/ P2 z7 R/ A4 }  `液相色谱定量分析原理
9 o  Y" U- J* k- W) N' \在定性的基础上定量,需有纯物质作为标准物液相色谱定量是相对定量的方法:即由已知量的纯标样推算混合物中被测物的量定量的依据是:
! Y7 K3 u% ~% |1 V9 n6 }6 e: c, z

• 被测组分的量与响应值(峰高或峰面积)成正比
  
  0 g" V5 f- d# o: z* y9 Z" H1 f

• 由已知量的标样可求得定量校正因子
  
  ! E: S5 w# u# @7 v9 ^9 X: `

• 定量校正因子:是定量计算公式中的比例常数,其物理意义是单位响应值(峰面积)所代表的被测组分的量
  
  % X. g( v& j) h: D

• 测定未知组分的响应值,通过定量校正因子即可求得其含量
  
  5 g% W( F: H3 E& {

液相色谱定量分析的步骤

1、选择一个适合定量分析的色谱方法：

• 确认被检测组分峰,并达到分离度(R)大于1.5
• 确定被测组分色谱峰的一致性(纯度)
  ( T4 e* ]% `. s8 y  H+ V) @4 R! A
  
  / ~/ \7 A/ r% u! l8 f

• 确定方法的检测限及定量限;灵敏度及线性范围
  
  
  3 W, i0 P% [' c8 ^- z

2、用不同浓度的标准样品建立校正曲线
0 C( ~. A8 {, h# q% [, R" I7 G3、考查定量方法的准确度及精密度
8 F) F3 i0 D, I4 d4、用相应的色谱管理软件实施样品采集,数据处理及报告结果
鉴别需定量的色谱峰(定性)
- _% [' l# _4 k" ]& j- \, B* U定性鉴别每个要定量的色谱峰
首先用标样确定欲定量之色谱峰的保留时间(Rt)，通过比较保留时间,找到未知样中各色谱峰所对应的组份，色谱定性是用与标样比较保留时间的方法，判据并不充分进一步的确认(定性)1、标准加入法
; F5 i9 s( ^' A4 }2、同时用其它方法：其它色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱) 、其它检测器 （PDA：光谱图比较、谱库检索；MS：质谱图解析、谱库检索）3、其它仪器方法
( x4 }9 f" h' z9 [5 ^: T# P& J8 J: n确认定量峰的一致性
确认色谱峰的一致性(纯度)

# g9 h: X6 U, [. K

• 保证每个色谱峰下只有一个被测的组份
  
  
  

• 检查是否有共流出的物质（杂质）干扰
  
  
  ) ^. M2 B' x! c1 |1 Z6 G$ }7 n4 f

色谱峰一致性(纯度)确认的方法

• 用光电二极管矩阵(PDA)检测器比较光谱图
  ( e# J- w1 S3 z$ `" p. b+ O6 E
  
  

• 峰纯度鉴定
  
  
  

• 2996的纯度角理论
  
  

常用的定量方法
标准曲线法,分为外标法和内标法:

外标法：在液相色谱中用得最多

内标法：准确，但是麻烦，在标准方法中用得最多

影响定量分析结果的因素

准确度不好可能由下述原因造成:

–峰面积积分不正确、样品分解或制样时导入杂质、样品瓶不密封,样品或溶剂挥发、制样不正确、进样问题、内标制备不正确

精密度不好可能的原因:

峰积分不正确、进样或进样器有问题、样品分解或制样时引入了杂质、色谱问题、检测器响应下降

文章来源：百度文库

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